外周血T淋巴细胞间缝隙连接在高血压炎症中的作用及机制研究

发布时间：2017-07-07 13:00

  本文关键词：外周血T淋巴细胞间缝隙连接在高血压炎症中的作用及机制研究

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【摘要】：目的:高血压是一种多因素的慢性疾病,发病过程中伴随低度炎症性反应。有研究发现,免疫细胞中存在缝隙连接通道,且在细胞增殖、活化及炎症因子释放过程中发挥重要作用,但缝隙连接是否参与高血压炎症反应目前尚不清楚。本研究以自发性高血压大鼠和原发性高血压患者外周血T淋巴细胞作为研究对象,探讨缝隙连接在高血压炎症反应中的作用。方法:动物血样实验:应用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化及CD4+和CD8+T淋巴细胞Cx40和Cx43表达;应用ELISA检测血清IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ表达;体外原代培养淋巴细胞,孵育缝隙连接阻断剂Gap27,应用实时荧光定量PCR检测大鼠淋巴细胞中炎症因子IL-2和IL-6的表达。临床血样实验:应用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化及CD4+和CD8+T淋巴细胞Cx40和Cx43表达;应用ELISA检测血清炎症因子IFN-γ和TNF-ɑ表达;体外原代培养淋巴细胞,缝隙连接阻断剂Gap27干预处理,应用流式细胞术检测CD4+和CD8+T淋巴细胞内IFN-γ和TNF-ɑ的表达以及应用ELISA技术检测细胞上清液中炎症因子IFN-γ和TNF-ɑ的表达。结果:动物血样实验:(1)SHR和WKY大鼠尾动脉血压差异有统计学意义(P0.05);(2)流式细胞术检测发现:SHR外周血CD4+/CD8+比值显著高于对照组(P0.01);外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞Cx40和Cx43表达显著高于对照组(P0.05);(3)ELISA检测发现:SHR血清炎症因子IL-2、IL-4和IL-6水平显著上调(P0.05),且与Cx40和Cx43高表达呈显著正相关(P0.05);(4)缝隙连接阻断剂Gap27可显著下调大鼠外周血淋巴细胞间IL-2和IL-6的表达(P0.05)。临床血样实验:(1)原发性高血压患者血压显著升高(P0.05);(2)流式细胞术检测发现:原发性高血压患者外周血CD4+/CD8+比值显著增加(P0.01);外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞Cx40和Cx43表达显著上调(P0.01);(3)ELISA检测发现:原发性高血压患者血清炎症因子IFN-γ和TNF-ɑ表达水平显著上调(P0.05),且与Cx40和Cx43高表达呈显著正相关(P0.05);(4)缝隙连接阻断剂Gap27可显著下调淋巴细胞内以及细胞上清中炎症因子IFN-γ和TNF-ɑ表达(P0.05)。结论:本研究结果表明高血压伴随炎症反应,机体外周血T淋巴细胞亚群紊乱,促炎因子释放增多,同时伴随着构成T淋巴细胞间缝隙连接通道的Cx40和Cx43表达显著上调,应用缝隙连接阻断剂阻断淋巴细胞间信息通讯后促炎因子的释放显著下降。提示高血压通过上调连接蛋白的表达,增强T淋巴细胞间缝隙连接通讯,炎症因子的释放增加。缝隙连接通道阻断剂通过抑制缝隙连接通道信息传递作用,改变缝隙连接介导的T淋巴细胞增殖活化用,降低炎症因子的释放,提示缝隙连接参与调节高血压炎症反应。
【关键词】：高血压 T淋巴细胞 缝隙连接 炎症反应
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-21
• 1 材料12-14
• 1.1 实验动物和血样采集12
• 1.2 主要试剂12-13
• 1.3 主要仪器13-14
• 2 方法14-21
• 2.1 血压测定14
• 2.2 细胞培养14-15
• 2.3 流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和连接蛋白的表达15-16
• 2.4 ELISA检测血清及细胞上清中炎症因子表达16-17
• 2.5 CCK-8 检测外周血淋巴细胞增殖反应17
• 2.6 MTT检测外周血淋巴细胞增值活化反应17
• 2.7 实时荧光定量PCR检测炎症因子IL-2 和IL-6 表达17-20
• 2.8 统计学方法20-21
• 实验结果21-35
• 1 动物实验结果21-26
• 1.1 SHR和WKY大鼠尾动脉血压比较21
• 1.2 SHR和WKY大鼠外周血T淋巴细胞亚群比较21
• 1.3 SHR和WKY大鼠血清炎症因子比较21-23
• 1.4 SHR和WKY大鼠外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴细胞Cx40和Cx43比较23
• 1.5 SHR外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴细胞Cx40和Cx43和炎症因子相关性分析23-24
• 1.6 缝隙连接阻断剂Gap27对大鼠外周血淋巴细胞炎症因子IL-2 和IL-6 影响24-26
• 2 临床血样实验结果26-35
• 2.1 临床资料分析显示26-27
• 2.2 原发性高血压患者和非高血压健康者外周血T淋巴细胞亚群比较27-28
• 2.3 原发性高血压患者和非高血压健康者外周血CD4~＋和CD8~＋T淋巴细胞Cx40和Cx43表达28-29
• 2.4 原发性高血压患者和非高血压健康者血清炎症因子比较29-30
• 2.5 EH患者外周血Cx40和Cx43和炎症因子相关性分析30
• 2.6 缝隙连接阻断剂Gap27对淋巴细胞间炎症因子IFN-γ 和TNF-ɑ 的影响30-35
• 讨论35-38
• 结论和展望38-39
• 参考文献39-45
• 文献综述45-51
• 参考文献48-51
• 致谢51-52
• 作者简介52-53
• 导师评阅表53

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本文编号：530248