ABCA1基因启动子区突变鉴定及其对猪血浆高密度脂蛋白水平的影响

发布时间：2017-07-20 21:15

  本文关键词：ABCA1基因启动子区突变鉴定及其对猪血浆高密度脂蛋白水平的影响

  更多相关文章： HDL ABCA1 启动子 SNP

【摘要】：高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)在调节机体内血浆胆固醇水平的动态平衡起到了关键性的作用。血浆中的胆固醇过量的累积会导致动脉粥样硬化。大量的实验研究证实了 ATP 结合盒转运蛋白 A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)介导了血浆HDL生成,将体内过量的胆固醇和各类脂蛋白转化为磷脂从而形成HDL。血浆中高密度脂蛋白水平越高,一些心血管疾病的发生概率就越低。在大量的人类疾病和动物模型的研究中已经证实了提高肝脏ABCA1的活性能够增加血浆高密度脂蛋白的水平。本实验以ABCA1作为候选基因,挖掘ABCA1基因启动子区域的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点,分析其与ABCA1基因表达水平及血浆HDL水平的关系。本实验取高低组HDL样品各30个进行DNA混池测序,将ABCA1启动子全部区域测序,进行高低组之间比较。得到了在HDL高组和低组中等位基因分布模式存在差异的两个SNP位点,分别为c.-608AG和c.-418TA。采用等位基因特异性PCR技术对这两个位点进行基因分型,通过对526个四元杂交猪的大群分型验证发现这两个位点是完全连锁的,并且只形成了 G-A和A-T两种单倍型。结果显示,G-A/G-A基因型比A-T/A-T基因型拥有更高的血浆HDL水平。对两组各12个不同基因型个体的ABCA1表达水平分析,结果表明G-A/G-A基因型表达水平显著高于A-T/A-T基因型(p0.05)。通过双荧光素酶活性报告实验检验两种单倍型启动子的活性,结果表明G-A启动子比A-T启动子具有更高的活性,二者差异显著(P0.05)。点突变实验显示,c.-418 TA是引起ABCA1转录活性发生变化的关键位点,碱基T突变为A能够引起ABCA1基因启动子活性升高,并且促进了 ABCA1基因表达水平升高,从而提高了血浆HDL水平。本研究通过鉴定ABCA1基因启动子区与血浆HDL水平相关的功能性变异,进一步丰富了血浆HDL水平变异的遗传学机制和理论,为预防动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)和冠心病的治疗提供了新的思路。
【关键词】：HDL ABCA1 启动子 SNP
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 缩略词10-12
• 引言12-13
• 第一章 文献综述13-25
• 1 高密度脂蛋白研究概况13-20
• 1.1 高密度脂蛋白的分级13-15
• 1.2 高密度脂蛋白的蛋白组15-16
• 1.3 高密度脂蛋白的生成与代谢16-18
• 1.4 高密度脂蛋白的作用18-20
• 2 ABCA1的研究概括20-25
• 2.1 ABCA1的结构20-21
• 2.2 ABCA1的功能21-22
• 2.3 ABCA1介导RCT22-23
• 2.4 ABCA1的调控23-25
• 第二章 ABCA1基因调控区多态性筛选25-39
• 1 实验材料25-27
• 1.1 实验动物25
• 1.2 主要实验试剂25-26
• 1.3 主要实验溶剂配方26
• 1.4 主要仪器及实验器械26-27
• 1.5 网络资源与生物信息学软件27
• 2 实验方法27-31
• 2.1 猪高密度脂蛋白的测定27
• 2.2 ABCA1基因表达量与猪高密度脂蛋白的相关性27-29
• 2.3 ABCA1基因启动子区SNP的筛选29-30
• 2.4 突变位点基因分型30-31
• 3 实验结果31-36
• 3.1 猪ABCA1基因启动子的获取31
• 3.2 ABCA1基因表达量与HDL的相关性31-33
• 3.3 ABCA1基因启动子区SNP位点的筛选33-34
• 3.4 SNP位点基因分型34-36
• 4 讨论36-39
• 第三章 ABCA1基因调控区SNP位点对启动子活性的影响39-57
• 1 实验材料39-40
• 1.1 实验样品39
• 1.2 主要实验试剂39
• 1.3 主要仪器及实验器械39-40
• 1.4 网络资源与生物信息学软件40
• 2 实验方法40-50
• 2.1 构建pGL3-GA/AT两种双荧光素酶报告载体40-45
• 2.2 构建点突变双荧光素酶报告载体45-47
• 2.3 双荧光素酶报告载体的启动子活性分析47-50
• 3 实验结果50-55
• 3.1 菌液PCR鉴定构建载体50-51
• 3.2 双酶切鉴定构建载体51
• 3.3 测序验证点突变重组载体51-52
• 3.4 ABCA1不同单倍型启动子活性分析52-54
• 3.5 转录因子结合位点预测54-55
• 4 讨论55-57
• 全文结论57-59
• 参考文献59-71
• 致谢71-73
• 硕士期间发表的论文73

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本文编号：570036