探讨TRPV1受体对M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用

发布时间：2017-07-29 19:23

  本文关键词：探讨TRPV1受体对M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用

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【摘要】：背景:近年来的研究证实,在高血压、冠心病等心血管疾病发生与发展的不同阶段,炎症是一个主要的、共同的病理生理学特征。心血管疾病往往是一种以血管内皮细胞损伤、单核/巨噬细胞浸润为特征的慢性炎症反应性疾病。因此控制炎症可能是当今治疗这些疾病的有前途的方法之一。目前研究表明,瞬时受体电位香草醛亚型1受体(transient receptor potential vanilloid type1 channel,TRPV1)能够抑制炎症,在炎症状态下对机体有保护作用。中药吴茱萸作为治疗心血管疾病的常用中药已有一定历史,多方面的研究结果提示其有效成分吴茱萸(Evodiamine,EVO)可能为TRPV1受体激动剂。因此,进一步揭示TRV1受体在炎症中的作用,探讨TRPV1受体对M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用,对心血管疾病等慢性炎症反应性疾病的治疗具有重要的临床意义。目的:本实验在人单核细胞白血病细胞(humanmonocyticleukemiacellline,THP-1)培养模型上,利用白介素-4(interleukin-4,IL-4)诱导THP-1分化为M2型巨噬细胞,通过观察TRPV1受体对M2型巨噬细胞表型相关指标的影响,以及吴茱萸碱对该过程的影响作用,从而阐明TRPV1受体对M2型巨噬细胞功能的调控作用及吴茱萸碱的干预作用,为进一步揭示TRPV1受体及吴茱萸碱的抗炎作用奠定基础。方法:1.实验分组及干预:将对数生长期的THP-1以3×105个/孔密度铺细胞于6孔板,以2mlRPMI1640+10%FBS培养基培养。待细胞长至80%以上开始进行分组加药刺激,具体分组如下:1)Vehicle组:加入vehicle使其终浓度为1/20002)IL-4组:加入IL-4使其终浓度为10ng/ml3)CAP+IL-4组:分别加入Capsaicin和IL-4使其终浓度分别10umol/L和10ng/ml4)CAPZ+CAP+IL-4组:分别加入Capsazepin、Capsaicin和IL-4使其终浓度分别为10umol/L、10umol/L和10ng/ml5)EVO+IL-4组:分别加入EVO和IL-4使其终浓度分别为10umol/L和10ng/ml6)capz+evo+il-4组:分别加入capsazepin、evo和il-4使其终浓度分别为10umol/l、10umol/l和10ng/ml各组细胞在37℃5%c02条件下培养12h。培养处理后,取上清液及细胞成分,进行相关指标测定。2.观察指标1)酶联免疫吸附试验(elisa)检测tgf-β1的产生2)rt-pcr检测细胞目的基因arginase-1、mannosereceptormrna的表达3)westernblot检测arginase-1、mannosereceptor蛋白的表达结果:1.酶联免疫吸附试验(elisa)检测tgf-β1的产生与vehicle组相比,经il-4诱导的m2型巨噬细胞,其细胞因子tgf-β1的产生明显增加(p0.05),利用cap特异性激活trpv1受体后能明显降低tgf-β1的产生(p0.05),且该作用可被trpv1受体拮抗剂capz部分拮抗(p0.05)。2.rt-pcr检测细胞目的基因arginase-1、mannosereceptormrna的表达与vehicle组相比,经il-4诱导的m2型巨噬细胞,其表面特定标志分子arginase-1、mannosereceptormrna的表达明显增加(p0.05),利用cap特异性激活trpv1受体后能明显降低arginase-1、mannosereceptormrna的表达水平(p0.05),且该抑制作用可被trpv1受体拮抗剂capz所拮抗(p0.05)。3.westernblot检测arginase-1、mannosereceptor蛋白的表达与vehicle组相比,经il-4诱导的m2型巨噬细胞,其表面特定标志分子arginase-1、mannosereceptor蛋白的表达明显增加(p0.05),利用cap特异性激活trpv1受体后能明显降低arginase-1、mannosereceptor蛋白的表达水平(p0.05),且该抑制作用可被trpv1受体拮抗剂capz所拮抗(p0.05)。4.通过吴茱萸碱干预后可明显降低il-4所诱导的m2型巨噬细胞的功能,其主要表现为tgf-β1产生下降、arginase-1、mannosereceptormrna和蛋白表达水平下降(p0.05),并且该抑制作用可被trpv1受体拮抗剂capz所拮抗(p0.05)。1.在THP-1细胞培养模型上,激活TRPV1受体后能明显降低IL-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达,且该作用可被TRPV1受体拮抗剂所阻断,提示TRPV1受体可调控M2型巨噬细胞的功能。2.在THP-1细胞培养模型上,吴茱萸碱能明显降低IL-4诱导的M2型巨噬细胞表型相关指标的表达,且该作用可被TRPV1受体拮抗剂所阻断,提示吴茱萸碱可能通过激活TRPV1受体调控M2型巨噬细胞的功能。
【关键词】：瞬时受体电位香草醛亚型1(TRPV1) M2型巨噬细胞 吴茱萸碱(EVO) 炎症
【学位授予单位】：河南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-26
• 1. 实验材料16-19
• 1.1 细胞16
• 1.2 试剂与耗材16-17
• 1.3 实验仪器17-18
• 1.4 试剂配制18-19
• 2. 实验方法19-25
• 2.1 细胞株复苏、传代、冻存19-20
• 2.2 实验分组及干预20
• 2.3 指标测定20-25
• 3. 统计学处理25-26
• 结果26-33
• 1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TGF-β1的产生26-27
• 2. RT-PCR检测细胞目的基因Arginase-1、MannoseReceptormRNA的表达27-29
• 3. Westernblot检测Arginase-1、MannoseReceptor蛋白的表达29-33
• 讨论33-38
• 1. 巨噬细胞的异质性及其表型特点33-34
• 2. 巨噬细胞的异质性与炎症性疾病的相关性34
• 3. TRPV1的分子结构及生物学特性34-35
• 4. TRPV1在炎症中的作用35-36
• 5. 中医药对炎症的认识36
• 6. 本实验的研究讨论36-38
• 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-45
• 附录45-52
• 附录1 文献综述45-52
• 参考文献49-52
• 附录2 在校期间科研情况和论文著作52

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本文编号：590724