活化的心脏成纤维细胞TRPC通道的表达及意义

发布时间：2017-07-30 13:10

  本文关键词：活化的心脏成纤维细胞TRPC通道的表达及意义

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【摘要】：目的:本实验主要通过试剂诱导心肌纤维化,观察心脏纤维细胞活化前后TRPC通道各亚型的表达[1],了解TRPC在纤维化的级联瀑布中的作用及相关亚型表达程度,为人类心肌纤维化相关疾病的预防和治疗寻找新的靶点和开辟新视野。方法:将10只SD大鼠随机分为2组,每组5只,即刺激干预组(A组)和空白对照组(B组),针对A组实验组大鼠一次性腹腔注射异丙肾上腺素(剂量:5mg/kg.d)[2];B组空白对照组大鼠以一次性腹腔注射生理盐水(剂量:5mg/kg.d),连续注射14d,取两组大鼠心尖部心肌[3],1、取A、B组大鼠心肌少许,每一只大鼠做2个病理切片,分别做HE染色和Masson染色,电子显微镜下观察心肌组织中纤维化程度及胶原纤维的分布,对比实验组与空白对照组心肌组织的变化[4]。2、取实验组大鼠的心尖部心肌组织,分离、纯化、培养纤维细胞,取的同源性心肌纤维细胞[5]。3、分为M组与N组,M组为空白对照,N组给予TGFβ1试剂刺激,刺激完后给予提取M、N两组大鼠胶原纤维的m RNA,分离出目的基因,针对目的基因转录,给予行PCR检测,给予行Western Blot,了解目的基因的蛋白翻译情况[6]。结果:1、实验对象A、B组大鼠心尖部组织,通过HE染色及Masson染色,均提示A、B组大鼠心肌纤维化程度出现明显差异(有图片做对照),A组明显高于B组,统计学分析指出:A组与B组大鼠心肌纤维化程度有明显差异(P0.01)[7];2、通过反复重复性试验(5次),应用相应引物,观测TRPC1-7各亚型m RNA表达在A、B两组的差异,绘制柱形图,应用统计学分析示[8]:TRPC1在A、B组无明显差异(P0.05)、TRPC2为假基因、TRPC3存在明显差异(P0.05)、TRPC4无明显差异(P0.05)、TRPC5无明显差异(P0.05)、TRPC6存在明显差异(P0.05)、TRPC7无明显差异(P0.05),综上所述,纤维化模型处理之后,在纤维化的胶原纤维TRPC3、TRPC6的m RNA的表达出现明显差异[9];3、应用Western Blot技术进一步验证PCR的结果,分析得出TRPC3和TRPC6 m RNA的翻译具有相关性,差异性明显(P0.05),与RT-PCR结果一致[10]。结论:心肌纤维母细胞经刺激后活化为肌成纤维细胞,由于纤维化级联瀑布放大反应的存在,纤维化程度大且面积广,在纤维化进程中,TRPC通道相关亚型在转录水平及翻译水平出现高表达,尤其以TRPC3、TRPC6最为显著[11],分析得出心肌纤维化及TRPC通道的表达具备相关性,具有统计学意义,可作为干预心肌纤维化的新靶点,控制纤维化的级联反应的进程,为抗纤维化药物的研发提供理论依据[12]。
【关键词】：TRPC通道 活化的心脏成纤维细胞 钙离子通透通道 细胞外基质蛋白(ECM)
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-15
• 研究材料与方法15-31
• 1 实验材料15-19
• 1.1 实验动物15
• 1.2 实验试剂15-16
• 1.3 实验主要仪器16-18
• 1.4 实验试剂配制18-19
• 2 实验方法19-28
• 2.1 建立心肌纤维化模型19
• 2.2 标本的留取与处理19-20
• 2.3 HE染色步骤20-21
• 2.4 胶原纤维快速染色步骤（试剂盒染色法）21-23
• 2.5 心肌纤维细胞的培养23-24
• 2.6 RNA的提取24
• 2.7 逆转录（RT）反应步骤24-25
• 2.8 实时定量qPCR反应25-26
• 2.9 蛋白电泳26-28
• 3 统计学分析28-29
• 4 技术路线图29-31
• 结果31-35
• 讨论35-40
• 结论40-41
• 参考文献41-47
• 综述 心脏成纤维细胞TRPC通道的研究进展47-58
• 参考文献55-58
• 附录58-59
• 作者简介及读研期间主要科研成果59-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈慧勤;林默君;刘晓如;;慢性低氧对大鼠左右心室的功能及TRPC亚家族表达的影响[J];中国应用生理学杂志;2014年03期

2 刘婵;商黔惠;石耿辉;赵宇;祝之明;;瞬时受体电位通道C亚族和炎症在高盐饮食致左心室纤维化中的作用[J];中国病理生理杂志;2013年12期

3 薛婉婉;洪华山;林晓红;林军华;方美琴;;自发性高血压大鼠左室心肌壁内小动脉平滑肌瞬时受体电位通道的表达[J];中国临床药理学与治疗学;2013年08期

4 刘小菁;李君丽;陈晓莹;吴文超;李良;;力学敏感TRPC通道介导心肌细胞肥大的力学门控新机制初探[J];医用生物力学;2013年S1期

5 林勇;黄卫斌;张蓉芳;曾松;刘泰i，

本文编号：594350