2-甲氧基雌二醇通过GPER受体信号通路抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖

发布时间：2017-08-01 16:35

  本文关键词：2-甲氧基雌二醇通过GPER受体信号通路抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖

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【摘要】：目的:低氧、特殊药物、异常的血流动力学状态等因素均可以刺激肺动脉平滑肌细胞,使其表现出过度增殖的特性,进而引起肺血管重塑以及肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)。雌激素代谢产物2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2ME)可以通过抑制肺血管炎症及血管重塑,从而对肺动脉高压产生保护性作用,然而其具体分子生物学机制尚不清楚。G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)是近年来发现的一种雌激素膜型受体,可以介导雌激素在心血管系统疾病中的保护性作用,然而该受体在肺循环中的表达及意义不清楚。新近研究发现,2ME是GPER受体的一种高亲和力激动剂。本研究以人肺动脉平滑肌细(human pulmonary artery smooth muscle cell,hPASMC)胞为研究对象,探讨2ME对低氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖活性的影响及其与GPER受体信号通路之间的关系。方法:1体外培养人肺动脉平滑肌细胞:将购置的人肺动脉平滑肌细胞进行传代培养,取第5-8代处于对数生长期的传代细胞作为实验细胞,随机分为:A.常氧组、B.低氧组、C.低氧+2ME干预组、D.低氧+2ME+G15干预组。常氧组培养于37℃,充有5%CO_2和95%空气的培养箱内;各低氧组均培养于37℃,充有3%O_2、5%CO_2和92%N_2的三气培养箱内;2ME干预组培养基中2ME浓度为0.2μM;G15干预组培养基中加入GPER受体拮抗剂G15浓度为0.01μM,均孵育48h。2通过MTT试验比较各组实验细胞给予干预后48h细胞生长情况。3通过RT-PCR技术检测各实验组细胞中增质细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)及GPER受体mRNA转录水平。4通过Western blot技术检测各实验组细胞中PCNA和GPER受体蛋白表达水平。结果:1成功获得hPASMC传代培养细胞。2实验细胞条件干预48h后,MTT实验结果提示低氧组OD值高于其他各组;常氧组与低氧+2ME+G15组之间OD值无统计学差异;低氧+2ME组OD值最低。3实验细胞条件干预48h后,RT-PCR结果显示低氧组和低氧+2ME+G15组PCNA基因mRNA转录水平无统计学差异,但较其他两组显著升高;低氧+2ME组与常氧组间PCNA转录水平无统计学差异。常氧组GPER基因mRNA转录水平显著高于其他各组,低氧+2ME组和低氧+2ME+G15组GPER转录水平无统计学差异,但均高于低氧组。4实验细胞条件干预48h后,Western blot结果显示常氧组细胞PCNA蛋白水平显著低于其他三组;低氧组和低氧+2ME+G15组PCNA蛋白水平无统计学差异;低氧+2ME组PCNA蛋白水平显著高于常氧组,但低于其他两个低氧处理组。常氧组GPER受体蛋白表达水平高于其他各组;低氧组和低氧+2ME组GPER受体蛋白表达水平无统计学差异,但均高于低氧+2ME+G15组。结论:1低氧刺激可以诱导hPASMC增殖活性增加。2 2ME可以抑制低氧环境下hPASMC的增殖活性。3 2ME对低氧环境下hPASMC增殖能力的抑制作用可能是通过活化GPER受体信号实现的。
【关键词】：2-甲氧基雌二醇 GPER 人肺动脉平滑肌细胞 细胞增殖 肺动脉高压
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-16
• 结果16-17
• 附图17-21
• 附表21-23
• 讨论23-25
• 结论25-26
• 参考文献26-30
• 综述 G蛋白偶联雌激素受体信号通路与肺脏疾病的相关性30-48
• 参考文献38-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

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1 金鑫;左学志;田，

本文编号：605191