小鼠骨髓来源的祖细胞亚群分化能力及心梗修复能力的比较研究

发布时间：2017-08-02 09:25

  本文关键词：小鼠骨髓来源的祖细胞亚群分化能力及心梗修复能力的比较研究

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【摘要】：目的:研究小鼠骨髓来源的Sca-1~+/CD31~+亚群与Sca-1~+/CD31~-亚群在向心肌细胞和血管内皮细胞的分化能力及其心梗修复能力的差异。方法:从小鼠骨髓中分离出具有多向分化潜能的骨髓单个核细胞(Bone Mononuclear Cells,BMNCs),进一步通过流式细胞术分选出Sca-1~+/CD31~+亚群与Sca-1~+/CD31~-亚群。在添加血管内皮细胞生长因子(VEGF),成纤维细胞生长因子(h FGF-B),表皮细胞生长因子(EGF),胰岛素生长因子(R3-IGF-1)和抗坏血酸(Ascorbic acid)的5%FBS/EBM-2中培养14天,进而通过免疫荧光染色和RT-PCR检测内皮细胞标志物v WF,VE-cadherin和CD31的表达。以此来比较骨髓来源的不同祖细胞亚群向血管内皮细胞定向分化能力的差异。在添加Wnt通路拮抗剂DKK-1,二甲基亚砜(DMSO),骨形态发生蛋白(BMP-2),成纤维细胞生长因子(FGF-4和FGF-8),以及5-氮胞苷(第一至第三天)的基础培养基中培养14天,进而通过免疫荧光染色和RT-PCR检测心肌细胞标志物Nkx2.5,c TnT和GATA-4等的表达。从而比较小鼠骨髓来源的不同祖细胞亚群向心肌定向分化能力的差异。气管插管开胸行小鼠冠状动脉前降支(LAD)结扎,建立小鼠心肌梗死的模型。将Sca-1~+/CD31~+亚群、Sca-1~+/CD31~-亚群和单个核细胞(MNCs)注射入梗死心肌周围,7天和28天后分别检测心脏超声并于28天取心脏组织,检测细胞存活、血管再生和心肌纤维化程度。结果:免疫荧光染色和RT-PCR的结果表明,在血管内皮细胞诱导培养基中,Sca-1~+/CD31~+亚群更易于分化成血管内皮细胞,而Sca-1~+/CD31~-亚群增殖缓慢,内皮细胞的标志物表达很低;在心肌细胞诱导培养基中,Sca-1~+/CD31~-亚群更易于分化成心肌细胞,c Tn T的阳性表达率高于Sca-1~+/CD31~+亚群和MNCs。体内注射骨髓来源的祖细胞亚群,心脏彩超提示:7天和28天时Sca-1~+/CD31~+亚群对心功能的改善显著优于Sca-1~+/CD31~-亚群和MNCs。而且28天时Sca-1~+/CD31~+亚群在心梗周边区域存活数目多,显著提高了心梗周边区域的毛细血管密度,显著降低了心梗后心肌的纤维化程度。结论:骨髓来源的Sca-1~+/CD31~+亚群在体外更易于分化成血管内皮细胞,在体内对心梗后心功能的改善显著优于Sca-1~+/CD31~-亚群和MNCs。
【关键词】：骨髓来源的祖细胞亚群 内皮细胞 心肌细胞 分化
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-19
• 1、材料与仪器11-12
• 2、实验方法12-18
• 3、统计学方法18-19
• 结果19-28
• （一）小鼠骨髓来源的祖细胞的分离及流式鉴定19
• （二）内皮细胞诱导分化实验19-22
• （三）心肌细胞诱导分化实验22-24
• （四）体内实验24-28
• 讨论28-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述37-46
• 参考文献43-46
• 中英文对照缩略词表46-47
• 致谢47-48

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本文编号：608599