转化生长因子-β1对大鼠心脏成纤维细胞胶原和α-辅肌动蛋白-2的房室差异表达研究

发布时间：2017-08-05 10:05

  本文关键词：转化生长因子-β1对大鼠心脏成纤维细胞胶原和α-辅肌动蛋白-2的房室差异表达研究

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【摘要】：目的：观察转化生长因子-p1对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白和α-辅肌动蛋白-2在心房、心室表达的差异,并探讨其形成的分子机制。方法：组织贴块法原代培养大鼠心房、心室成纤维细胞,经SABC免疫细胞化学染色方法鉴定细胞后,分别进行以下实验(1)应用羟脯氨酸消化法观察不同浓度TGF-β1 (0、5、10ng/ml)及不同作用时间(6h、12h、24h、48h)对心房、心室成纤维细胞羟脯氨酸含量的影响；(2)用筛选的TGF-β1最佳干预浓度及作用时间分别刺激心房、心室成纤维细胞后,羟脯氨酸法比较两种细胞的培养液中羟脯氨酸的含量,RT-PCR比较两种细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、α-辅肌动蛋白-2的mRNA表达,蛋白质印迹法比较二者α-辅肌动蛋白-2, Smad2/3、p-Smad2/3及Smad7蛋白的表达。结果：(1)TGF-β1对大鼠心房、心室成纤维细胞均具有促进胶原蛋白合成的作用,当TGF-β1刺激条件为5ng/ml,24h时作用最强。(2)用上述条件TGF-β1分别刺激心房、心室成纤维细胞,心室成纤维细胞刺激干预组I、III型胶原mRNA及蛋白的表达较同期培养未刺激对照组稍增加,但差异无统计学意义；心房成纤维细胞刺激干预组中I、III型胶原mRNA及蛋白的表达较同期培养未刺激对照组显著升高(P0.01)；心房成纤维细胞刺激干预组与心室成纤维细胞刺激干预组相比,前者I、III型胶原mRNA及蛋白表达的增加更明显,差异有意义(P0.01)。(3)心室、心房成纤维细胞TGF-β1刺激干预组α-辅肌动蛋白-2 mRNA及蛋白的表达较同期培养对照组均增高,差异有统计学意义(P0.05)；与心室成纤维细胞TGF-β1刺激干预组相比,心房成纤维细胞TGF-β1刺激干预组α-辅肌动蛋白-2 mRNA及蛋白表达进一步升高,差异有统计学意义(P0.01)。(4)心室成纤维细胞TGF-β1刺激干预组Smad2/3、p-Smad2/3蛋白水平较同期培养对照组稍增加,Smad7蛋白水平稍降低,差异无统计学意义；心房成纤维细胞TGF-β1刺激干预组Smad2/3表达的增加无统计学意义,p-Smad2/3蛋白水平较同期培养对照组明显增加,Smad7蛋白水平明显减少,差异具有统计学意义(P0.01)；与心室成纤维细胞TGF-β1刺激干预组相比,心房成纤维细胞TGF-β1刺激干预组p-Smad2/3蛋白表达的升高,Smad7蛋白表达的降低更显著,差异有统计学意义(P0.01)。结论：1.转化生长因子-p1可能既引起心脏成纤维细胞胶原代谢异常,又引起细胞骨架蛋白的表达异常。2.转化生长因子-p1引起的胶原代谢异常及骨架蛋白表达异常在心房成纤维细胞中的表现较心室成纤维细胞更明显,提示心房成纤维细胞可能对TGF-β1具有更强的易感性。3.通过对TGF-β1下游信号分子Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7的检测,推测TGF-β1对心房、心室成纤维细胞具有差异影响的作用机制可能为TGF-β1/SMAD信号通路。
【关键词】：转化生长因子-β1 心房重构 胶原蛋白 α-辅肌动蛋白-2 Smads通路
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.75
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 1 材料与方法15-27
• 2 结果27-34
• 3 讨论34-37
• 全文结论37-38
• 参考文献38-41
• 文献综述41-49
• 参考文献46-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的论文50

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本文编号：624300