微小RNA-9在心肌纤维化中的作用及其相关机制的研究

发布时间：2017-08-05 20:09

  本文关键词：微小RNA-9在心肌纤维化中的作用及其相关机制的研究

  更多相关文章： 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 miRNA-9 PDGFR-β

【摘要】：研究背景和目的：心肌纤维化是许多心血管疾病的终末期共同表现,是以心肌成纤维细胞的过度增殖及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白等细胞外基质的过量沉积为特征。目前抑制心肌纤维化的主要方法是使用RAAS系统抑制剂如ACEI和ARB类药物等。MiRNA是真核细胞内一类具有负性调控作用的小RNA,通过与其靶基因的特异性结合,抑制基因的表达。MiRNA参与了真核生物基因表达的几乎全部过程,越来越多的研究表明miRNA在心血管疾病的发生发展过程中发挥了重要作用。本研究主要探讨微小RNA-9 (miRNA-9, miR-9)在心肌纤维化中的作用及其相关机制。方法：PDGF-BB (20ng/ml、50ng/ml)或血清(10%)处理大鼠新生心肌成纤维细胞48小时,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组大鼠心肌成纤维细胞中miRNA-9的表达量。MiRNA-9、miRNA-9+miRNA-9抑制剂(anti-miR9)分别转染大鼠心肌成纤维细胞,采用噻唑蓝细胞增殖活性检测法(MTT)、qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blotting)分别检测各组大鼠心肌成纤维细胞增殖率、血小板衍生生长因子受体-β (PDGFR-β)及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ、 collagen Ⅲ)表达量。PDGFR-β过表达质粒、PDGFR-β过表达质粒+miRNA-9分别转染大鼠心肌成纤维细胞,检测各组PDGFR-β及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表达量。SiPDGFR-β转染大鼠心脏心肌成纤维细胞,检测PDGFR-β及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ表达量。PDGFR-β双荧光素酶报告基因质粒+miRNA-9转染大鼠心肌成纤维细胞,检测荧光素酶活性。结果：PDGF-BB或血清处理大鼠心肌成纤维细胞48小时后,miRNA-9表达量较对照组明显下调(P0.05)。MiRNA-9组细胞增殖率,PDGFR-β、collagen Ⅰ、 collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达量较对照组均明显下调(P0.05), miR-9+ miRNA-9抑制剂组上述指标较对照组变化无统计学意义(P0.05)。PDGFR-β过表达质粒组PDGFR-β及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ mRNA较对照组明显上调(P0.05),较PDGFR-β过表达质粒+miRNA-9组变化无统计学意义(P0.05)。SiPDGFR-β组PDGFR-β、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达量较对照组明显下调(P0.05), siPDGFR-β与miRNA-9对大鼠心肌成纤维细胞具有相似的抑制作用。PDGFR-β双荧光素酶报告基因质粒+miRNA-9组荧光素酶活性较对照组明显下调(P0.05)结论：MiRNA-9通过抑制靶基因PDGFR-β表达进而抑制心肌成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的表达,发挥抑制心肌成纤维细胞的纤维化效应。
【关键词】：心肌纤维化 心肌成纤维细胞 miRNA-9 PDGFR-β
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.23
【目录】：

• 英文缩略词简表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-11
• 材料与方法11-22
• 结果22-35
• 讨论35-39
• 结论39
• 参考文献39-44
• 附录44-46
• 致谢46-47
• 综述(附参考文献)47-61
• 参考文献55-61

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本文编号：626695