不同数量脂肪干细胞对不同剂量野百合碱诱发的大鼠肺动脉高压的影响

发布时间：2017-08-06 00:11

  本文关键词：不同数量脂肪干细胞对不同剂量野百合碱诱发的大鼠肺动脉高压的影响

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【摘要】：背景:我们课题组先前成功运用野百合碱(MCT)诱导建立肺动脉高压(PAH)大鼠模型并发现脂肪干细胞(ADSCs)移植能够显著降低PAH大鼠的平均肺动脉压(mPAP)、改善肺血管和右心室重构。但目前对于治疗PAH所需的合适的ADSCs数量、干预时间与治疗疗程尚未完全清楚。目的:研究不同数量的ADSCs移植对不同剂量MCT诱导的PAH大鼠的治疗作用,探索ADSCs移植治疗的最佳细胞数目、干预时机及治疗时间。方法:(1)以胶原酶消化法从SD大鼠腹股沟皮下脂肪组织分离培养出ADSCs;流式细胞仪鉴定其表型;成脂、成骨诱导分化鉴定其多向分化潜能;按以下方案经腹腔一次性注射相应剂量的MCT诱导建立PAH和经左颈外静脉移植相应数量的ADSCs,在相应的时间点用右心导管法检测mPAP和用称重法测量右心室肥厚指数(RVHI)。(2)分四个部分:1.不同数量ADSCs干预PAH大鼠:36只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、PAH组和各个ADSCs组。PAH和ADSCs组予40mg/kg MCT,NC组予相应体积的生理盐水;各个ADSCs组于MCT注射后7天移植ADSCs,数量分别为0.5×106个(A1组)、1.0×106个(A2组)、3.0×106个(A3组)和5.0×106个(A4组),NC和PAH组予等体积生理盐水。各组n均为6,分别于MCT注射后4周检测各项指标。2.不同数量ADSCs干预正常SD大鼠:25只SD大鼠随机分为NC组和各个ADSCs组。各组大鼠予一次性腹腔注射相应体积的生理盐水,7d后各个ADSCs组移植ADSCs,数量分别为:0.5×106个(N-A1组)、1.0×106个(N-A2组)、3.0×106个(N-A3)和5.0×106个(N-A4),NC组予等体积生理盐水;各组n均为5,分别于颈外静脉注射后3周检测各项指标。3.1.0×106adscs干预不同剂量mct诱导的pah大鼠:70只sd大鼠随机分为nc组、不同剂量mct诱导的pah组和adscs组。pah和adscs组分别予mct20mg/kg(p-20和a-20组)、30mg/kg(p-30和a-30组)和40mg/kg(p-40和a-40组)。adscs组在mct注射后7天移植1.0×106adscs,其余各组予等体积生理盐水。mct注射后4周和8周检测各项指标,各组每个时间点n均为5。4.1.0×106adscs不同移植时间、不同治疗周期干预pah大鼠:48只sd大鼠随机分为nc组(nc-4w和nc-5w组,n均为8)、pah组(p-4w和p-5w组,n均为8)和adscs组。pah和adscs组予40mg/kgmct,nc组予相应体积的生理盐水。adscs组分别于mct注射后1天(a1d-4w组,n=8)、7天(a7d-4w组,n=8)和14天(a14d-4w和a14d-5w组,n均为8)移植1.0×106adscs。各组n均为6,nc-5w、p-5w和a14d-5w组于mct注射后5周检测各项指标,其余各组于mct注射后4周检测各项指标。结果:1.adscscd29和cd90阳性,cd34、cd45和cd31阴性;成脂和成骨诱导后胞浆内分别出现橘红色脂滴和棕红色钙化颗粒。2.①与nc组相比,pah、a1、a3和a4组的mpap和rvhi均升高,a2组的rvhi升高而mpap无统计学意义;与pah组相比,a2组的mpap降低而rvhi差异无统计学意义;pah、a1、a3、a4四组间的mpap和rvhi差异均无统计学意义;与a1组相比,a2组的mpap和rvhi差异均无统计学意义;与a2组相比,a3、a4组的mpap升高而rvhi差异无统计学意义。②各组间mpap和rvhi差异均无统计学意义。③nc、p-20和a-20组之间在4周、8周时mpap和rvhi差异均无统计学意义;与nc组相比,p-30和a-30组的mpap和rvhi在4周时升高而8周时无统计学意义,p-30和a-30两组之间相比在4周和8周时均无统计学意义;与nc组相比,p-40和a-40组的mpap和rvhi在4周时升高,8周时p-40和a-40组全部死亡;与p-40组相比,a-40组的mpap在4周时下降而rvhi无统计学意义。④与nc组相比,p-4w、a1d-4w组的mpap和rvhi均有不同程度的升高,a7d-4w和a14d-4w组的rvhi升高而mpap差异无统计学意义;与p-4w组相比,A7d-4w和A14d-4w组的mPAP降低而RVHI差异无统计学意义;与A1d-4w组相比,A7d-4w的mPAP降低而RVHI差异无统计学意义,A14d-4w组的mPAP和RVHI差异均无统计学意义;P-4w和A1d-4w组之间以及A7d-4w和A14d-4w组之间相比差异无统计学意义。与NC组相比,P-5w和A14d-5w组的mPAP和RVHI均有不同程度的升高;与P-5w组相比,A14d-5w组的mPAP和RVHI明显降低。结论:1.一次性腹腔注射40mg/kg MCT4~5周可以诱导建立稳定的PAH大鼠模型。单次小剂量MCT不能构建稳定的PAH大鼠模型。2.一次性腹腔注射40mg/kg MCT 14天后移植1×106ADSCs治疗2~3周能有效地降低PAH大鼠的mPAP。3.PAH时RVHI与mPAP间存在明显的对数相关性。
【关键词】：脂肪干细胞 肺动脉高压 野百合碱
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 缩略词表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 引言14-16
• 实验材料与方法16-25
• 1 实验材料16-18
• 1.1 实验动物16
• 1.2 实验材料与仪器16-18
• 2 实验方法18-25
• 2.1 ADSCs的分离、培养与鉴定18-21
• 2.1.1 ADSCs的分离和培养18-19
• 2.1.2 ADSCs 的传代19
• 2.1.3 ADSCs 的鉴定19-20
• 2.1.4 ADSCs 的移植20-21
• 2.2 动物实验分组及干预措施21-23
• 2.3 右心导管法测定平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）23-24
• 2.4 右心室肥厚指数（right ventricular hypertrophy index, RVHI）的测定24
• 2.5 统计学方法24-25
• 结果25-39
• 1 大鼠ADSCs的鉴定25-27
• 1.1 大鼠ADSCs形态学特征25-26
• 1.2 流式细胞仪测定ADSCs的表面标记26
• 1.3 ADSCs的多向诱导分化26-27
• 2 动物的一般状态及存活情况27-28
• 3 ADSCs对MCT诱导的PAH大鼠mPAP和RVHI的影响28-37
• 3.1 不同剂量ADSCs干预MCT诱导的PAH大鼠28-30
• 3.2 不同剂量ADSCs干预正常SD大鼠30-32
• 3.3 1×10~6 ADSCs干预不同剂量MCT诱导的PAH大鼠32-34
• 3.4 1.0×10~6 ADSCs不同移植时间、不同治疗周期干预PAH大鼠34-37
• 4 平均肺动脉压与右室肥厚指数的相关性分析37-39
• 讨论39-49
• 1 肺动脉高压动物模型39-40
• 2 ADSCs对MCT诱导的PAH大鼠mPAP和RVHI的影响40-46
• 2.1 不同数量ADSCs干预MCT诱导的PAH大鼠40-42
• 2.2 不同剂量ADSCs干预正常SD大鼠42-43
• 2.3 1×10~6 ADSCs干预不同剂量MCT诱导的PAH大鼠43-45
• 2.4 1.0×10~6 ADSCs不同移植时间、不同治疗周期干预MCT诱导的PAH大鼠45-46
• 3 mPAP与RVHI的相关性46-49
• 结论49-50
• 参考文献50-55
• 综述55-64
• 参考文献60-64
• 致谢64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 马凯;邢泉生;邢介龙;泮思林;;不同剂量野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型的实验研究(英文)[J];现代生物医学进展;2013年21期

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本文编号：627533