血管紧张素Ⅱ在血管内皮细胞自噬中作用及其机制

发布时间：2017-08-11 18:27

  本文关键词：血管紧张素Ⅱ在血管内皮细胞自噬中作用及其机制

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【摘要】：目的:探究血管紧张素II(Angiotensin II,Ang II)在人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)自噬中的作用及其机制。方法:以HUVEC为研究对象,以不同浓度的Ang II及不同时间刺激HUVEC,MTT检测所给浓度的Ang II作用24 h时的细胞活力;分别用Ang II的I型受体拮抗剂(ARB)、NADPH氧化酶抑制剂(Apocynin)、线粒体ATP敏感性钾通道抑制剂(5-HD)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂(L-NAME)、自噬抑制剂(3-MA)及其促进剂(Rapamycin)预处理细胞,再加入Ang II刺激细胞,用western blot方法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1(BECN 1)、P62表达量的变化,用免疫荧光的方法检测自噬小体数目变化;通过转染敲除自噬基因ATG-5后,用western blot方法检测上述自噬相关蛋白表达量的变化,免疫荧光检测自噬小体数目变化;用NO试剂盒检测NO含量变化,Western blot检测NOS表达量变化。结果:细胞接受所给浓度的Ang II刺激24 h时其活力无显著变化;不同浓度的Ang II以及在其作用于不同时间均可促进HUVEC的LC3-II/LC3-I、BECN表达量增多,P62表达量降低,表明Ang II可导致HUVEC自噬;ARB、NADPH氧化酶抑制剂以及线粒体ATP敏感性钾通道抑制剂5-HD均可减弱Ang II所致细胞上述自噬相关蛋白水平变化,表明Ang II引起的HUVEC自噬可通过ATI受体、NADPH氧化酶作用及线粒体ATP敏感性钾通道介导;Ang II对细胞作用24 h后NO、p-NOS水平下降,细胞自噬水平明显增高,L-NAME作用于细胞后的效应类似于Ang II的作用,表明Ang II可能通过NOS活性下降引起HUVEC自噬增强;3-MA和Rapamycin分别对Ang II所致的自噬水平起到抑制和加强作用。Ang II引起人脐静脉内皮细胞自噬,其机制可能是由AT1介导的NADPH氧化酶、线粒体ATP敏感性钾通道激活及NOS活性下降所致。
【关键词】：血管紧张素II 血管内皮细胞 线粒体ATP敏感性钾通道 NADPH氧化酶 一氧化氮合酶 自噬
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 实验材料与方法13-24
• 一 实验材料13-15
• （一）实验细胞13
• （二）主要试剂13-14
• （三）主要仪器14-15
• 二 实验方法15-24
• （一）人脐静脉内皮细胞培养15
• （二）细胞不同处理方式15-17
• （三）MTT测定细胞活性17
• （四）Western blot17-20
• （五）免疫荧光20-21
• （六）NO含量测定21-23
• （七）统计学分析23-24
• 实验结果24-37
• 一、血管紧张素II刺激 24 h对血管内皮细胞生存率（活力）的影响24
• 二、不同浓度的血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞自噬的影响24-25
• 三、血管紧张素Ⅱ作用不同时间点对血管内皮细胞自噬的影响25-26
• 四、ARB在血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬中的作用26-27
• 五、NADPH氧化酶在血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬中的作用27-28
• 六、线粒体ATP敏感性钾通道在血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬中的作用28-29
• 七、一氧化氮合酶在血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬中的作用29-31
• 八、沉默自噬基因对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬的影响31-32
• 九、自噬抑制剂 3-MA对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬的影响32-33
• 十、自噬促进剂雷帕霉素对血管紧张素Ⅱ诱导血管内皮细胞自噬的影响33-34
• 十一、自噬小体免疫荧光结果34-37
• 讨论37-39
• 结论和展望39-40
• 参考文献40-45
• 综述45-57
• 参考文献51-57
• 缩略词表57-59
• 攻读学位期间公开发表的论文59-60
• 致谢60-61

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本文编号：657605