WDR26在大鼠H9c2心肌细胞缺氧所致线粒体自噬中的作用及机制研究

发布时间：2017-08-15 10:00

  本文关键词：WDR26在大鼠H9c2心肌细胞缺氧所致线粒体自噬中的作用及机制研究

  更多相关文章： 心肌细胞 缺氧 WDR26 PINK1-Parkin 线粒体自噬

【摘要】：背景心肌缺血预适应是目前所发现的最为强有力的心肌内源性保护现象,其具体分子作用机制尚不清楚。WDR26是利用c DNA芯片技术和抑制消减杂交技术克隆的一个大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调新基因。本研究利用western blot、免疫荧光技术检测WDR26在大鼠H9c2心肌细胞缺氧时的表达变化及WDR26过表达对线粒体自噬的影响,探讨WDR26在缺氧所致的心肌细胞线粒体自噬中发挥的作用机制,进而为临床上防治心肌缺血损伤提供新的思路和实验依据。目的探讨WDR26在心肌细胞缺氧引起的线粒体自噬中的作用和机制,进一步揭示其在心肌细胞内源性保护中的作用,为心肌缺血的防治提供新的思路和线索。方法1.Western blot检测细胞缺氧时WDR26的表达:常规培养大鼠H9c2心肌细胞,采用N2饱和低糖无血清DMEM培养基,细胞培养瓶置于厌氧袋中密封,于37℃,5%CO2孵育箱内分别培养3 h、6 h和12 h,构建细胞缺氧模型。将实验分为对照组和缺氧3 h、6 h、12 h组,采用western blot技术检测WDR26在大鼠H9c2心肌细胞缺氧时的表达。2.观察WDR26过表达对H9c2心肌细胞缺氧时的影响:培养WDR26过表达的H9c2心肌细胞,将WDR26的开放阅读框架ORF克隆入真核表达载体pc DNA3.1,采用脂质体将其转染H9c2心肌细胞株,促进WDR26过表达,并构建和转染空载体组(Neo group)。实验分为Neo对照组、Neo缺氧组、WDR26对照组、WDR26缺氧组,构建细胞6 h缺氧模型,检测细胞上清培养液LDH含量,MTT比色法检测细胞活性。3.观察WDR26过表达对缺氧所致细胞自噬的影响:实验分为Neo对照组、Neo缺氧组、WDR26对照组、WDR26缺氧组,构建细胞6 h缺氧模型。采用western blot、免疫荧光技术检测LC3、p62的表达变化。应用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位变化,按照JC-1试剂说明书进行操作,荧光显微镜下观察JC-1单体或聚合体形成情况,Image J光密度分析软件对红/绿比进行分析。4.观察H9c2心肌细胞缺氧时线粒体PINK1-Parkin通路的变化:实验分Neo对照组、Neo缺氧组、WDR26对照组、WDR26缺氧组,构建6 h细胞缺氧模型,采用western blot技术检测线粒体蛋白PINK1、Parkin的表达变化。5.采用SPSS17.0对数据进行统计学分析。结果1.与对照组相比,缺氧组WDR26蛋白表达升高,且在6h达到高峰。2.与Neo对照组和WDR26对照组相比,Neo缺氧组和WDR26缺氧组上清培养液中LDH释放明显上升,而细胞活力显著下降;与Neo缺氧组相比,WDR26缺氧组上清培养液LDH释放显著下降,而细胞活力明显提升。3.与Neo对照组和WDR26对照组相比,Neo缺氧组和WDR26缺氧组LC3II/LC3I比值显著增加,而p62表达明显减少;WDR26缺氧组与Neo缺氧组相比,LC3II/LC3I比值明显升高,而p62的表达明显降低。与Neo对照组和WDR26对照组相比,Neo缺氧组和WDR26缺氧组LC3标记的自噬体数量明显增加;WDR26缺氧组与Neo缺氧组相比,LC3标记的自噬体数量明显增多。4.与Neo对照组和WDR26对照组相比,Neo缺氧组和WDR26缺氧组红/绿荧光比值显著下降;WDR26缺氧组与Neo缺氧组相比红/绿荧光比值明显降低。与Neo对照组和WDR26对照组相比,Neo缺氧组和WDR26缺氧组Parkin和PINK1表达量显著增加;WDR26缺氧组与Neo缺氧组相比Parkin和PINK1表达量明显升高。结论1.H9c2心肌细胞缺氧可诱导WDR26的表达。2.WDR26可通过PINK1-Parkin通路促进细胞缺氧所致的线粒体自噬,从而对心肌细胞起到保护作用。
【关键词】：心肌细胞 缺氧 WDR26 PINK1-Parkin 线粒体自噬
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-11
• 1 材料和方法11-21
• 2 结果21-27
• 3 讨论27-31
• 4 小结31-32
• 参考文献32-35
• 综述：心肌缺血预适应的心脏保护机制35-48
• 参考文献44-48
• 附录 中英文缩略词（Abbreviation）48-49
• 攻读学位期间发表文章情况49-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 叶锦霞;王岚;梁日欣;杨滨;;儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究[J];中国中药杂志;2008年07期

2 蔡小军;陈艳;俞云;陆一;;回心草对心肌细胞缺氧损伤的保护作用[J];中国实验方剂学杂志;2012年05期

3 魏少奎;荣烨之;韩玉升;;心肌细胞缺氧再给氧损伤的形态变化及药物保护作用[J];心功能杂志;1993年03期

4 郭秀丽,张世玲;达曲班对体外培养心肌细胞缺氧缺糖性损伤的保护作用[J];中国医药工业杂志;2001年10期

5 陈治军,田玉科;芬太尼对培养心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用[J];中华麻醉学杂志;2002年02期

6 李全凤,王孝铭,徐长庆,朱世军,杨宝峰,艾静,高焕焕,赵雅君;利用激光扫描共聚焦显微镜观察丹参滴丸对乳鼠心肌细胞缺氧的保护作用[J];中国病理生理杂志;2000年10期

7 何泉华,何岚,许实波,邓芹英;穿心草(口山)酮对心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用[J];中药材;2000年07期

8 李建宇;李灵芝;张永亮;张新宁;龚海英;;蕨麻醇提物对心肌细胞缺氧损伤的保护作用[J];中国新药杂志;2007年12期

9 陈t跨，

本文编号：677524