吡哆醇抗动脉粥样硬化的作用及机制研究

发布时间：2017-08-31 22:37

  本文关键词：吡哆醇抗动脉粥样硬化的作用及机制研究

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【摘要】：研究背景动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是一种以内皮细胞受损、平滑肌细胞侵入血管内膜、血管平滑肌细胞增殖为主的血管重塑病理过程,是当前人类死亡的主要原因之一。它是多致病因素共同诱发的一种疾病,主要包括内皮损伤、炎症反应及氧化应激等。在AS的进展过程中,氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)在动脉管壁脂代谢中独特而复杂的作用正逐渐受到重视。ox-LDL是由亲水表面层及疏水核心组成的多分子复合物,是低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)进入并积聚于内皮下后受自由基诱导导致氧化修饰形成。其能够被巨噬细胞所吞噬,当ox-LDL在巨噬细胞内积聚到一定数量时,将会促进巨噬细胞变为泡沫细胞。在巨噬细胞吞噬ox-LDL的过程中,细胞膜上的ox-LDL受体起到了非常重要的作用,目前发现血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1, LOX-1)是摄取ox-LDL的关键受体之一,除此之外,其他的清道夫受体如1型清道夫受体(scavenger receptors type 1, SR-A1)、白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36, CD36)也参与了此过程。吡哆醇(pyridoxine)是维生素B6的主要成分,其作为同型半胱氨酸(homocysteine,hcy)的辅酶,主要通过降低血hcy发挥抗AS作用。有研究发现,pyridoxine在AS发展过程中对于内皮保护起着重要作用,但具体机制尚不清楚,可能与CD36等受体有关。近年,本实验组对pyridoxine的保护机制进行了一系列研究。结果显示,在ox-LDL作用的HUVEC中,pyridoxine能有效缓解ox-LDL对于内皮细胞的损伤作用,使内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性增加,产物一氧化氮(nitric oxide, NO)的水平升高。但pyridoxine对于泡沫细胞的形成是否有作用,目前尚不清楚。本研究主要目的是探讨pyridoxine是否能够抗巨噬细胞摄取ox-LDL,并减缓泡沫细胞的形成,并进一步研究其作用机制。材料与方法细胞模型构建 传代培养小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞,至填满六孔板约60-70%后,随机分为4组,分别为18h对照组,18 h ox-LDL组,24 h对照组,24 h ox-LDL组,给予50mg/L ox-LDL,培养18h及24 h后,分别使用油红O染色检测细胞吞噬脂滴情况、DHE检测细胞氧化应激水平、Western Blot检测细胞表面LOX-1蛋白表达情况。Pyridoxine作用机制实验 细胞培养同上,随机分成5组,除对照组、ox-LDL组外,剩下三组分别用10 umol/L、1umol/L、100nmol/L三种不同浓度的pyridoxine进行预处理15分钟后,再加入ox-LDL,培养24 h后,分别使用油红O染色检测细胞吞噬脂滴情况、DHE检测细胞氧化应激水平、Real-time PCR检测LOX-1、SR-A1、CD36的mRNA表达水平、Western Blot检测细胞表面LOX-1蛋白表达情况。结果 细胞模型构建 结果显示,在油红O染色实验中,RAW264.7细胞在给予ox-LDL后,相较18h组,24 h组吞噬脂滴更多,呈环状分布在细胞膜内侧,有着更好的泡沫细胞转化率。DHE检测结果显示24 h组氧化应激水平更高,Western Blot实验结果提示给予ox-LDL 24h后,细胞LOX-1蛋白表达显著升高(P0.05),而18h组LOX-1蛋白水平相比对照组无显著差异。Pyridoxine作用机制实验 在油红O染色实验中,RAW264.7细胞在给予不同浓度的pyridoxine后,脂滴摄取均有不同程度地减少,且这种减少呈浓度依赖性。氧化应激水平也同样受到浓度依赖性地抑制。在mRNA水平上,LOX-1、CD36在加入ox-LDL后表达显著提高(P0.05),SR-A1没有变化；只有最高浓度(10 umol/L)的pyridoxine可以抑制LOX-1的表达(P0.05),而CD36则不受pyridoxine地抑制。蛋白水平上,不同浓度的pyridoxine均可抑制LOX-1蛋白的表达上调(P0.05),从而发挥抗AS炎症反应的作用,其中,10 umol/L和1 umol/L相比100 nmol/L的浓度,抑制更加显著(P0.05)。结论以上结果表明,pyridoxine可通过①减少血管氧化应激；②降低血管炎症反应；③下调LOX-1蛋白表达抑制ox-LDL诱导的人外周血单核细胞源性的巨噬细胞脂质的沉积,从而发挥抗AS发展、延缓AS进展的作用,为AS的治疗和预防提供了新的药物靶点和治疗思路,具有潜在的临床与药物研发应用价值。
【关键词】：吡哆醇 动脉粥样硬化 氧化低密度脂蛋白 氧化应激 炎症
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 第一章 绪论10-15
• 第二章 材料与方法15-24
• 第三章 结果24-32
• 第四章 讨论32-37
• 第五章 全文总结37-38
• 参考文献38-46
• 文献综述46-62
• 参考文献53-62
• 攻读学位期间发表文章情况62-63
• 致谢63-65

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本文编号：768373