榆干离褶伞溶栓酶对乙醇诱导内皮细胞损伤的保护作用研究

发布时间：2017-09-05 14:13

  本文关键词：榆干离褶伞溶栓酶对乙醇诱导内皮细胞损伤的保护作用研究

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【摘要】：目的：研究榆干离褶伞(Lu.)溶栓酶对乙醇诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及抗血小板的作用。方法： (1)细胞实验：用200 μ mol/L乙醇诱导内皮细胞氧化损伤后,利用MTT法检测L.u溶栓酶对内皮细胞存活率；检测细胞上清液LDH活性；AO/EB双染法观察内皮细胞的凋亡；流式细胞仪检测细胞的线粒体跨膜电位和总活性氧的含量；Western bolt方法观察Caspase-8、Caspase-9、Cleaved Caspase-3、细胞色素C蛋白的表达；(2)动物实验：40%乙醇诱导内皮细胞损伤大鼠模型,HE染色观察颈动脉形态学变化；流式细胞仪检测血小板CD62p水平；ELISA法测定血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin、NOS、iNOS、eNOS水平：测定血清SOD、MDA、T-AOC和NO水平。结果： (1)细胞实验：MTT结果表明,L.u溶栓酶对乙醇诱导的氧化损伤有保护作用；与模型组相比,用药组细胞上清液的LDH活性下降；AO/EB染色结果显示,模型组内皮细胞固缩成圆状且呈橘黄色,部分细胞胞浆出现空泡状结构,且出现红染结构,用药后内皮细胞红染结构逐渐消失,凋亡细胞减少,细胞形态逐渐恢复正常结构；流式细胞仪检测线粒体跨膜电位和总活性氧结果表明,与模型组相比用药组的线粒体跨膜电位明显升高,而细胞内活性氧含量明显下降；Western bolt结果表明,与模型组相比,用药组明显减少细胞色素C、Cleaved Caspase3、蛋白的表达,增加Caspase8、Caspase9蛋白表达。(2)动物实验,HE染色结果显示：乙醇诱导损伤后血管严重收缩,血管内皮细胞层断续,内皮细胞脱落明显；用药组血管收缩程度减少,内皮细胞脱落现象明显减轻,血管内皮细胞完整并连续。流式细胞仪检测CD62p结果表明,用药组血小板CD62p水平明显下降,说明Lu.溶栓酶抑制血小板的活化。ELISA检测结果表明,与模型组相比,用药组血清NOS、iNOS、eNOS、Renin、Ang-Ⅱ和ET-1水平明显下降。用药组明显抑制乙醇诱导引起的SOD和T-AOC水平的下降,并减少MDA和NO水平。结论：(1)L.u溶栓酶对乙醇诱导的血管内皮细胞的损伤具有一定的保护作用。(2)L.u溶栓酶具有抑制血小板活化的作用。
【关键词】：榆干离褶伞溶栓酶 人脐静脉内皮细胞 凋亡 血小板 抗氧化 肾素-血管紧张素
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 中英文缩词8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 材料与方法13-24
• 2.1 实验器材、试剂13-15
• 2.1.1 细胞、动物13
• 2.1.2 样品13
• 2.1.3 实验试剂13-14
• 2.1.4 实验仪器14-15
• 2.2 实验方法15-24
• 2.2.1 细胞培养准备15-16
• 2.2.2 HUVEC的培养及实验分组16-17
• 2.2.3 MTT法测L.u溶栓酶对乙醇诱导的HUVEC存活率的影响17
• 2.2.4 细胞上清液LDH活性测定17
• 2.2.5 AO/EB染色观察细胞的凋亡情况17-18
• 2.2.6 流式细胞仪检测细胞跨膜电位与ROS含量18-19
• 2.2.7 Western Blot法检测细胞Cleaved Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Ctyc C蛋白表达19-21
• 2.2.8 动物模型制备21
• 2.2.9 颈动脉形态学观察21-22
• 2.2.10 流式细胞仪检测CD62p22
• 2.2.11 生化指标检测22-23
• 2.2.12 结果统计方法23-24
• 第三章 实验结果24-33
• 3.1 L.u溶栓酶对HUVECs的存活率的影响24
• 3.2 L.u溶栓酶对细胞上清液LDH活性的影响24-25
• 3.3 AO/EB染色观察内皮细胞凋亡情况25
• 3.4 L.u溶栓酶对线粒体跨膜电位与总活性氧含量25-28
• 3.4.1 L.u溶栓酶对细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)的影响25-26
• 3.4.2 L.u溶栓酶对细胞内总活性氧(ROS)的影响26-28
• 3.5 L.u溶栓酶对Cleaved Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Ctyc C蛋白表达的影响28-29
• 3.6 L.u溶栓酶对颈动脉HE染色组织形态学的影响29
• 3.7 L.u溶栓酶对血小板CD62p活性的影响29-30
• 3.8 L.u溶栓酶对血清生化指标的影响30-33
• 3.8.1 L.u溶栓酶对血清SOD、MDA、T-AOC的检测30-31
• 3.8.2 L.u溶栓酶对血清NO、NOS、iNOS、eNOS的影响31
• 3.8.3 L.u溶栓酶对血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin的影响31-33
• 第四章 讨论33-38
• 第五章 结论38-39
• 参考文献39-43
• 致谢43-44
• 硕士期间发表论文情况44

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本文编号：798454