IL-17A通过EphrinB2信号通路抑制小鼠心脏成纤维细胞的激活

发布时间：2017-09-06 14:40

  本文关键词：IL-17A通过EphrinB2信号通路抑制小鼠心脏成纤维细胞的激活

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【摘要】：目的 心肌纤维化是心室重塑的重要病理基础,IL-17A参与心肌纤维化,但机制尚未阐明,EphrinB2信号通路参与肾脏的纤维化,但其是否在心肌纤维化中起作用还未见报道。我们的预实验发现IL-17A可以降低心脏成纤维细胞EphrinB2的表达,因此,本研究旨在观察IL-17A是否通过EphrinB2信号通路参与了心脏成纤维细胞的激活。 方法 应用酶消化及差速贴壁法分离培养新生小鼠原代心脏成纤维细胞,并应用vimentin、CD31、troponin TSM myosin抗体进行免疫荧光染色鉴定培养的心脏成纤维细胞。免疫荧光法用于检测心脏成纤维细胞EphrinB2的表达。实验分为对照组、慢病毒阴性组、慢病毒感染组,IL-17A组,慢病毒阴性对照+IL-17A组、慢病毒感染组+IL-17A组。用CCK8及划痕试验检测小鼠心脏成纤维细胞的增殖及迁移能力,实时荧光定量PCR (real-time PCR)及Western blot检测a-SMA、I、III型胶原的表达情况。各组实验均独立重复3次,实验数据以平均数±标准误(x+SE)表示,两组样本平均数比较时用t检验,多组数据间比较采用ANOVA(方差分析),应用SPSS19.0作统计分析,P0.05为差异有统计学意义。 结果 体外分离培养的小鼠心脏成纤维细胞经免疫荧光染色vimentin(+)、CD31(-)、 troponin T (-)、SM myosin (-),纯度在95%以上,且小鼠心脏成纤维细胞大量表达EphrinB2; IL-17A (100ng/ml)处理24h后,小鼠心脏成纤维细胞的增殖迁移能力、a-SMA的表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成均较对照组显著降低。与此同时,EphrinB2表达也较对照组明显下降；慢病毒感染沉默EphrinB2基因后,心脏成纤维细胞的增殖迁移能力、a-SMA表达及胶原合成均较对照组显著降低,而EphrinB2基因过表达后结果则相反。EphrinB2基因沉默的心脏成纤维细胞IL-17A处理组即efnb2-shRNA+IL-17A与对照组即scramble+IL-17A组、control+IL-17A组相比,小鼠心脏成纤维细胞的增殖迁移能力、a-SMA的表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成均进一步降低。而EphrinB2过表达的心脏成纤维细胞IL-17A处理组即lenti-efnb2+IL-17A与对照组vector+IL-17A、control+IL-17A相比,逆转了IL-17A对小鼠心脏成纤维细胞的抑制作用。 结论 IL-17A抑制体外培养的新生小鼠成纤维细胞的增殖迁移,同时减少了a-SMA的表达及胶原的合成,并提示IL-17A通过抑制EphrinB2信号通路而发挥作用。
【关键词】：心脏成纤维细胞 EphrinB2 IL-17A 肌成纤维细胞 心肌纤维化
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文缩略词10-12
• 1 引言12-15
• 2 实验材料15-18
• 3 实验方法18-23
• 4 实验分组23-28
• 5 统计分析28-29
• 6 实验结果29-50
• 7 讨论50-54
• 参考文献54-59
• 综述59-78
• 参考文献68-78
• 作者简介78

【参考文献】

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1 马湘一;罗丹枫;李科珍;刘荣华;刘焱;朱涛;邓东锐;周剑峰;孟力;王世宣;马丁;;Suppression of EphB4 Improves the Inhibitory Effect of mTOR shRNA on the Biological Behaviors of Ovarian Cancer Cells by Down-regulating Akt Phosphorylatio[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2012年03期

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本文编号：803722