铁过载对临床患者及小鼠免疫细胞的影响

发布时间：2017-09-13 01:30

  本文关键词：铁过载对临床患者及小鼠免疫细胞的影响

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【摘要】：目的:探讨铁过载(iron overload,IO)对临床患者以及小鼠免疫细胞的影响。方法:根据特点收集临床铁过载患者外周血,并收集正常人外周血作为对照组。用流式细胞术分析外周血CD3+T及CD4/CD8比值,CD3+CD8-IFN-γ+(Th1)细胞、CD3+CD8-IL-4+(Th2)细胞,CD3+CD8+IFN-γ+(Tc1)细胞、CD3+CD8+IL-4+(Tc2)细胞;腹腔注射右旋糖酐铁建立小鼠铁过载模型,用流式细胞术分析小鼠及外周血CD3+T、CD4/CD8比值及B220+B淋巴细胞比例;进一步检测小鼠外周血Th1细胞、Th2细胞以及Tc1细胞、Tc2细胞;用流式细胞仪检测脾脏CD8+T淋巴细胞比例以及IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin细胞因子的分泌情况,Annexin/PI标记检测细胞的凋亡情况。免疫磁珠分选小鼠脾脏细胞得到CD8+T淋巴细胞,RT-PCR检测CD8+T淋巴细胞的IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin、bcl-2、bax基因表达。活性氧试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:1.铁过载患者淋巴细胞内LIP水平明显增长,CD3+T淋巴细胞ROS明显上升,P值均0.05。2.铁过载患者与对照组对比外周血中CD3+T淋巴细胞比例明显下降,CD4/CD8比值则明显上升;Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明显下降,P值均0.05。3.脾脏铁染色及流式细胞术检测LIP水平均提示发生小鼠发生铁过载。4.与对照组相比铁过载组小鼠外周血中CD3+T淋巴细胞中ROS明显上升,P0.05。5.与对照组相比,铁过载组小鼠外周血淋巴细胞计数以及比例(%)明显降低,P值均0.05,中性粒细胞比例(%)明显上升P0.05,但绝对数计数无明显变化。6.与对照组相比,铁过载组小鼠外周血中CD3+T淋巴细胞比例(%)显著下降,但CD4/CD8比值明显上升,P值均0.05。7.与对照组相比,铁过载组小鼠外周血Treg细胞比例(%)显著上升,Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值明显下降,P值均0.05。8.与对照组相比,铁过载组小鼠外周血CD3+CD8-T淋巴细胞凋亡率显著上升;与对照组相比,铁过载组小鼠外周血CD3+CD8+T淋巴细胞凋亡率显著上升,P值均0.05。9铁过载组小鼠脾脏中CD8+T淋巴细胞内ROS水平约为对照组的1.73倍。显著增加P0.05。10与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞比例(%)降低为对照组的0.52倍,P0.05。11与对照组相比,铁过载组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞分泌的IFN-γ,Granzyme-B明显降低;小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ(x10-4)基因表达Granzyme-B基因表达显著下降,P0.05。12与对照组相比,脾脏CD8+T淋巴细胞凋亡率(%)明显增高,P0.01;脾脏CD8+T淋巴细胞中bcl-2基因表达明显下降,而bax基因表达(x10-2)明显上升,P0.01。13上述铁过载对小鼠淋巴细胞的作用可经祛铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。结论铁过载通过上调ROS影响患者及小鼠外周血淋巴细胞比例,抑制CD3+T的比例,上调CD4/CD8比值,下调Th1/Th2比值以及Tc1/Tc2比值,增加CD3+CD8-T淋巴细胞以及CD3+CD8+T淋巴细胞凋亡率,去铁以及抗氧化治疗后可部分逆转。铁过载可通过上调脾脏CD8+T淋巴细胞内ROS抑制脾脏的CD8+T淋巴细胞IFN-γ,Granzyme-B基因表达,并抑制IFN-γ,Granzyme-B蛋白的分泌。另一方面,铁过载可通过上调脾脏CD8+T淋巴细胞内ROS诱导增加CD8+T淋巴细胞的凋亡,对凋亡基因bax起上调作用,而对bcl-2基因有抑制其表达的作用。
【关键词】：铁过载 T细胞亚群 凋亡 免疫 氧化应激
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R55
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、铁过载对患者以及小鼠外周血淋巴细胞的作用16-29
• 1.1 对象和方法16-21
• 1.1.1 实验材料16-19
• 1.1.2 实验方法19-21
• 1.2 结果21-26
• 1.2.1 铁过载患者外周血淋巴细胞的分析21
• 1.2.2 铁过载小鼠模型的建立21-22
• 1.2.3 小鼠外周血常规计数：22-23
• 1.2.4 流式细胞术分析小鼠外周血中淋巴细胞情况23
• 1.2.5 流式细胞术分析小鼠外周血中T淋巴细胞分化情况23-24
• 1.2.6 铁过载对小鼠外周血T淋巴细胞增殖与凋亡的影响24-25
• 1.2.7 铁过载诱导外周血中T淋巴细胞活性氧增加25-26
• 1.3 讨论26-27
• 1.4 小结27-29
• 二、铁过载对小鼠脾脏CD8+T细胞的凋亡及分泌功能的影响29-39
• 2.1 对象和方法29-31
• 2.1.1 实验材料29-30
• 2.1.2 实验方法30-31
• 2.2 结果31-37
• 2.2.1 成功建立小鼠模型31-32
• 2.2.2 小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞比例32-33
• 2.2.3 流式细胞术检测小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞凋亡情况33
• 2.2.4 小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞bcl-2、bax基因的表达33-34
• 2.2.5 流式细胞术检测小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞的因子分泌34-35
• 2.2.6 RT-PCR检测小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞IFN-γ、TNF-α、Granzyme-B、perforin基因的表达35-36
• 2.2.7 小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞活性氧36-37
• 2.3 讨论37-38
• 2.4 小结38-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 发表论文和参加科研情况说明43-45
• 综述 活性氧在免疫应答中的作用45-54
• 综述参考文献52-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 谢芳;赵明峰;朱海波;卢文艺;徐新女;肖霞;穆娟;刘鹏江;李玉明;;氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响[J];中华医学杂志;2011年46期

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本文编号：840718