NIX在高血压血管重塑中的生物学作用

发布时间：2017-09-13 06:45

  本文关键词：NIX在高血压血管重塑中的生物学作用

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【摘要】：目的探讨NIX在高血压诱导血管重塑进程中的表达变化、细胞分布及在血管平滑肌细胞中的作用,以发现高血压诱导血管重塑过程中新的调控分子,为有效控制、逆转血管重塑发生提供新的依据。方法1高血压诱导血管重塑进程中的NIX表达与细胞分布。1)采用腹主动脉缩窄术建立大鼠血管重塑模型,分为假手术组和手术组,每组8只,分别饲养8周。采用颈总动脉插管检测平均动脉压,采用HE染色检测血管组织的病理改变,采用Masson检测血管纤维化,采用蛋白免疫印迹法检测胶原和纤维连接蛋白表达水平,从而验证模型是否建立成功。采用蛋白免疫印迹法检测NIX的表达,免疫组化对NIX的表达进行定位,从而确定NIX在高血压血管重塑大鼠模型中的变化和细胞分布。2)采用不同浓度的去甲肾上腺素(Norepinephrin,NE)诱导建立血管平滑肌细胞纤维化模型,分为0 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L组,给予相应浓度的NE干预原代大鼠血管平滑肌细胞24小时。通过MTT、流式细胞术检测血管细胞增殖情况,蛋白免疫印迹达检测胶原蛋白和纤维链接蛋白表达水平,从而确定模型建立是否成功。采用蛋白免疫印迹法检测NIX的表达,从而确定NIX在血管平滑肌细胞纤维化过程中的变化。2 NIX在NE诱导血管平滑肌细胞中的生物学作用。1)应用高表达pc DNA3-NIX质粒转染大鼠血管平滑肌细胞,分为Control(C)组,pc DNA3组、pc DNA3-NIX组、NE组、NE+pc DNA3组、NE+pc DNA3-NIX组,转染24小时后,加入10-5mol/LNE干预24小时。采用蛋白免疫印迹法检测NIX的转染效果。采用MTT、流式细胞术检测血管平滑肌细胞的增殖情况,蛋白免疫印迹检测胶原蛋白和纤维链接蛋白的表达,从而确定NIX高表达对NE诱导的血管平滑肌细胞纤维化的影响。2)si RNA-NIX转染大鼠血管平滑肌细胞,分为C组、Negative control(NC)组、si RNA组、NE组、NE+NC组、NE+si RNA组,转染24小时后,10-5mol/L NE干预24小时。采用蛋白免疫印迹法检测NIX的转染效果。采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖情况,蛋白免疫印迹法检测胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达,从而确定抑制NIX的表达对NE诱导的血管平滑肌细胞纤维化的影响。结果1手术组大鼠的平均动脉压明显高于假手术组(P0.05);HE染色结合图像分析仪结果显示,手术组大鼠的中膜厚度、中膜面积、中膜厚度/血管内径高于假手术组(P0.05)。Masson染色的结果显示,手术之后,大鼠血管组织中胶原蛋白的蓄积增多。蛋白免疫印迹显示血管组织中胶原蛋白和纤维链接蛋白的的表达显著升高。表明高血压血管重塑大鼠模型构建成功。同时发现手术组大鼠血管组织中NIX的表达明显高于假手术组。免疫组化的结果表明NIX的表达主要定位在血管平滑肌细胞。2 MTT、流式细胞术结果显示,随着NE浓度的升高,大鼠血管平滑肌细胞增殖加剧(P0.05),蛋白免疫印迹的结果表明随着NE浓度的增加,胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达明显增加,表明NE诱导血管平滑肌细胞纤维化模型建立成功。同时,蛋白免疫印迹结果发现随着NE浓度升高,NIX的表达明显增加。3蛋白免疫印迹结果显示NIX高表达质粒成功转入。MTT和流式细胞术的结果显示当NIX高表达时,血管平滑肌细胞增殖加剧,同时NE诱导血管平滑肌细胞的增殖也得到了促进(P0.05),蛋白免疫印迹结果显示当NIX高表达时,胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达水平明显升高,且促进了NE诱导下的胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达。4蛋白免疫印迹结果显示si RNA-NIX成功转入。MTT和流式细胞术的结果显示当NIX表达受到抑制是时,血管平滑肌细胞增殖受到抑制,同时缓解了NE诱导血管平滑肌细胞的增殖(P0.05),蛋白免疫印迹结果显示当NIX的表达受到抑制时,胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达水平明显下降,且NE诱导下的胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达也明显减少。结论高血压血管重塑过程中,NIX的表达增加与血管纤维化的发生密切相关。此外,NIX在血管重塑过程中血管平滑肌细胞纤维化中起着调控作用。
【关键词】：血管重塑 NIX NE 血管平滑肌细胞 纤维化
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩率表10-11
• 引言11-12
• 第1章 高血压诱导血管重塑进程中的NIX表达与细胞分布12-32
• 1.1 实验材料与方法12-19
• 1.1.1 实验设备12-13
• 1.1.2 主要试剂13-14
• 1.1.3 实验动物14
• 1.1.4 实验方法14-19
• 1.1.5 统计学分析19
• 1.2 结果19-27
• 1.2.1 NIX在高血压诱导血管重塑大鼠模型中的表达与分布19-22
• 1.2.3 NIX在NE诱导血管平滑肌细胞纤维化过程中的变化22-27
• 1.3 讨论27-29
• 1.4 小结29
• 参考文献29-32
• 第2章 NIX在血管重塑中血管平滑肌细胞纤维化过程中的生物学作用32-47
• 2.1 实验材料与方法32-36
• 2.1.1 实验设备32-33
• 2.1.2 主要试剂33-34
• 2.1.3 实验方法34-36
• 2.1.4 统计分析36
• 2.2 结果36-42
• 2.2.1 NIX高表达在NE诱导血管平滑肌细胞中的作用36-39
• 2.2.2 抑制NIX在NE诱导血管平滑肌细胞中的作用39-42
• 2.3 讨论42-44
• 2.4 小结44
• 参考文献44-47
• 第3章 综述 高血压血管重塑的研究进展47-57
• 3.1 血流动力学变化47-48
• 3.2 血管活性物质48
• 3.3 内皮损伤48-49
• 3.4 血管平滑肌细胞增生49-50
• 3.5 细胞外基质蛋白的沉积50-51
• 3.6 展望51-52
• 参考文献52-57
• 结论57-58
• 致谢58-59
• 导师简介59-60
• 作者简介60-61
• 学位论文数据集61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 汪俊元;王安才;吴明;曹晓霞;李俊;;血管内皮生长因子与自发性高血压大鼠血管重构的关系[J];心脑血管病防治;2008年01期

2 霍士照;交感-肾上腺素能系统对冠状动脉粥样硬化性心脏病的影响[J];中国中西医结合急救杂志;2002年06期

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1 张燕;新型内皮素受体拮抗剂对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年

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本文编号：842161