线粒体Cx43在动脉粥样硬化中的作用与机制

发布时间：2017-09-17 06:06

  本文关键词：线粒体Cx43在动脉粥样硬化中的作用与机制

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【摘要】：目的:探讨线粒体Cx43在动脉粥样硬化中的作用与信号通路机制。方法:实验建立两个模型,①PDGF-BB刺激VSMCs增殖模型,分为3个小组:a.对照组,b.PDGF-BB组,c.PD98059+PDGF-BB组;②建立血管平滑肌细胞-内皮细胞共培养模型(VSMCs-ECs Co-culture model),分为两个小组:a.对照组,b.TNF-α组。采用MTT比色法检测各组VSMCs活性;荧光探针检测活性氧Reactive oxygen species(ROS);Western blot检测各组血管平滑肌细胞线粒体Cx43蛋白表达。结果:1.VSMCs增殖模型结果显示:①MTT实验结果显示:PDGF-BB组较control组吸光度值显著增加(P0.05),PD98059+PDGF-BB组较control组吸光度值显著减小(P0.05);PD98059+PDGF-BB组较PDGF-BB组吸光度值显著降低(P0.01);②荧光探针检测活性氧,荧光强弱与活性氧多少成正比。PDGF-BB组较control组,绿色荧光增强,提示活性氧增加。PD98059+PDGF-BB组绿色荧光较control组和PDGF-BB组减弱,提示活性氧减少;③Western blot结果:PDGF-BB组control组线粒体Cx43蛋白表达显著升高(P0.01),PD98059+PDGF-BB组比control组线粒体Cx43蛋白表达显著减少(P0.05),PD98059+PDGF-BB组比PDGF-BB组线粒体Cx43蛋白表达显著减少(P0.01)。2.VSMCs-ECs共培养模型结果显示:①MTT实验结果显示:TNF-α组较control组吸光度值显著增加(P0.05);②荧光探针检测活性氧:TNF-α组与control组相比,绿色荧光强度增强,提示活性氧增加;③Western blot结果:TNF-α组与control组相比,线粒体Cx43蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:1.PDGF-BB诱导VSMCs增殖及VSMCs-ECs共培养模型能明显增强VSMCs增殖能力,增加ROS含量,上调线粒体Cx43表达。2.ERK1/2途径参与了ROS含量增加及线粒体Cx43表达上调。3.研究结果为AS的防治提供了新的思路。
【关键词】：Atherosclerosis VSMCs Endothelial cells mitochondria Cx43 ERK1/2 PDGF-BB
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 实验材料与仪器12-16
• 2.1 实验材料12-14
• 2.1.1 主要购置试剂12-13
• 2.1.2 主要配置溶液13-14
• 2.2 主要仪器设备14-16
• 第3章 实验方法16-24
• 3.1 VSMCs细胞培养16-17
• 3.1.1 VSMCs传代培养16
• 3.1.2 VSMCs细胞冻存16-17
• 3.1.3 VSMCs细胞复苏17
• 3.2 VSMCs增殖模型17-18
• 3.2.1 VSMCs接种17
• 3.2.2 建立模型17-18
• 3.3 VSMCs与ECs共培养模型18
• 3.3.1 共培养模型建立18
• 3.3.2 实验分组18
• 3.4 Western blot检测线粒体Cx43 蛋白18-22
• 3.4.1 样品蛋白制备18-19
• 3.4.2 样品蛋白含量测定19
• 3.4.3 配胶19-20
• 3.4.4 灌胶和上样20
• 3.4.5 垂直电泳20
• 3.4.6 转膜20-21
• 3.4.7 样品蛋白免疫反应21
• 3.4.8 样品蛋白化学发光及曝光21
• 3.4.9 膜再生21-22
• 3.4.10 内参蛋白 β ATP Sythase免疫反应22
• 3.4.11 图像分析22
• 3.5 MTT比色法测定细胞活性22-23
• 3.5.1 VSMCs增殖模型22
• 3.5.2 共培养模型22-23
• 3.6 荧光探针活性氧检测23
• 3.7 数据统计学处理23-24
• 第4章 结果24-28
• 4.1 VSMCs增殖模型24-26
• 4.2 VSMCs-ECs共培养模型26-28
• 第5章 讨论28-31
• 5.1 VSMCs增殖与AS28
• 5.2 线粒体中的Cx4328-29
• 5.3 ERK1/2 通路与VSMCs增殖29-30
• 5.4 ROS与VSMCs增殖30
• 5.5 展望30-31
• 第6章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-38
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果38-39
• 综述39-45
• 参考文献43-45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 ;Outline of the Report on Cardiovascular Disease in China,2010[J];Biomedical and Environmental Sciences;2012年03期

2 赵明哲;刘靖华;李玉花;姜勇;;ERK信号通路的信号转导调控机制[J];国际病理科学与临床杂志;2009年01期

3 陈宝平,毛红娇,范芳燕,李江,夏强;缝隙连接脱耦联剂庚醇对大鼠缺血-再灌注损伤心肌的保护作用[J];中国病理生理杂志;2005年06期

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本文编号：867685