枸杞蛋白酶解液对SHR大鼠的降压效果研究

发布时间：2017-09-27 12:03

  本文关键词：枸杞蛋白酶解液对SHR大鼠的降压效果研究

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【摘要】：目的:高血压是心血管疾病发病的最重要危险因素之一。对血压的控制是降低心脑血管疾病的发病率、致残率和死亡率的有效措施。血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽是通过影响肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统而调节机体血压的。合成的血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂是目前用于治疗高血压的重要药物,食物蛋白源性ACE抑制肽因其安全性高成为活性肽研究领域的热点。本实验通过碱提酸沉法,从枸杞中提取枸杞蛋白,并利用蛋白酶分解所得枸杞蛋白酶解液,观察其对自发性高血压大鼠的降压效果,为制备天然枸杞ACE抑制肽和临床防治高血压病提供理论依据。方法:选取10-11周龄,体重240-280g的雄性高血压大鼠(SHR)40只和正常Wistar-Kyoto(WKY)大鼠8只,经适应性喂养1W后,根据所测基础血压及体重,按随机数字随机分为6组(每组8只),分别为:WKY正常对照组、阳性对照组、阴性对照组、低剂量组(枸杞蛋白酶解液40mg/kg)、中剂量组(枸杞蛋白酶解液80mg/kg)和高剂量组(枸杞蛋白酶解液100mg/kg)。实验组经灌胃给予不同浓度的枸杞蛋白酶解液,阴性对照组和WKY正常对照组灌胃给予相应剂量的蒸馏水,阳性对照组灌胃给予10mg/kg卡托普利。各组动物每日灌胃1次,实验周期为9W,实验期内各组动物自由进食饮水。采用无创多通道尾动脉测压实验系统于每周在固定时间测量大鼠清醒状态下的尾动脉SBP、DBP和心率,每次测血压3次,取3次测定的平均值为该测试点的血压和心率值。比较各组大鼠血压变化,同时观察大鼠的毛色、激惹度、饮水量等。饲养结束后,戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法测定大鼠血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,Real-time PCR法比较WKY、SHR大鼠心脏和肾脏组织中ACE、AT1R、ACE2和MasR mRNA的表达水平。结果:(1)大鼠的一般行为观察:实验期间,WKY组的大鼠鼠毛有光泽,双眼灵活有神,行动敏捷,对周围变化反应灵敏;SHR大鼠鼠毛无光泽且饮水量多,同时在提尾或捉持颈部时,抵抗剧烈、尖叫、暴跳,同笼大鼠频繁打斗、咬人等攻击性。SHR大鼠经两周治疗后,精神状态好转,毛发逐渐有光泽。(2)大鼠进食量、体重及心率变化:SHR大鼠的进食量均明显高于WKY(P0.05),但SHR大鼠间进食量无明显差异(P0.05)。实验前,各组大鼠的体重,两两比较差异无显著性(P0.05)。实验结束时,与WKY相比,SHR大鼠各组的体重均明显下降(P0.05),但各组之间心率无统计学差异(P0.05)。(3)大鼠脏器质量与脏器系数:与WKY组相比较,各组SHR大鼠心脏系数、肾脏系数和肝脏系数均明显升高(P0.05);但肺脏系数和脾脏系数无统计学差异(P0.05)。(4)枸杞蛋白酶解液对SHR大鼠血压的影响:实验开始时,SHR大鼠各组血压均明显高于WKY组(P0.05),但SHR大鼠各组间无明显差异(P0.05)。实验结束时,与阴性对照组相比较,阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组大鼠血压明显降低。(5)枸杞蛋白酶解液对SHR大鼠血浆AngⅡ含量的影响:与WKY组比较,阴性对照组和高剂量组的AngⅡ含量均显著升高;与阴性对照组比较,低剂量组和阳性对照组的AngⅡ含量均显著下降(P0.05);中、高剂量组的AngⅡ含量均无明显差异(P0.05)。(6)WKY、SHR大鼠肾脏组织中ACE、AT1R、ACE2和MasR mRNA的表达水平:与WKY组(1.000±0.085)相比,阴性对照组(2.624±0.631)、中剂量组(2.287±1.716)和高剂量组(2.396±0.632)大鼠肾脏中ACEmRNA表达水平均显著升高(P0.05);与阴性对照组相比(2.624±0.631),阳性对照组(1.230±0.540)和低剂量组(1.260±0.643)ACEmRNA表达水平均显著降低(P0.05);与WKY组相比,SHR大鼠肾脏中ACE2mRNA表达水平均显著下降(P0.05),与阴性对照组(0.427±0.085)相比,阳性对照组(0.659±0.134)和低剂量组(0.601±0.134)ACE2mRNA表达水平均显著升高(P0.05);ATIR受体,Mas受体mRNA表达分别与ACE、ACE2mRNA表达趋势基本一致,但没有显著性差异(P0.05)。结论:1、枸杞蛋白酶解液对SHR有一定程度的降压作用。2、枸杞蛋白酶解液可能通过调节ACE-AngII-AT1通路和ACE2-Ang(1-7)-Mas通路的平衡达到降压效果。
【关键词】：枸杞蛋白 酶解液 ACE抑制肽 降血压
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文缩略词表10-12
• 前言12-16
• 材料与方法16-26
• 1 实验材料16-17
• 2 研究方法17-26
• 研究结果26-41
• 1 大鼠一般情况26-29
• 2 大鼠血压29-35
• 3 枸杞蛋白酶解液对SHR血浆AngⅡ含量的影响35-36
• 4 大鼠心脏、肾脏组织中ACE，，AT1R，ACE2和MasR mRNA表达的实时荧光定量PCR分析36-41
• 讨论41-46
• 结论46-47
• 参考文献47-54
• 综述54-63
• 参考文献58-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间发表的学术论文64-65
• 个人简历65

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