IL-27对AA患者外周血中树突状细胞及单核细胞的影响

发布时间：2017-10-02 15:40

  本文关键词：IL-27对AA患者外周血中树突状细胞及单核细胞的影响

  更多相关文章： IL-27 再生障碍性贫血 树突状细胞 单核细胞

【摘要】：背景:再生障碍性贫血为多种病因通过免疫途径破坏骨髓造血干祖细胞引起的骨髓衰竭综合征,常因造血干祖细胞缺陷、造血微环境异常、免疫异常而导致全血细胞减少,表现贫血、出血和感染而危及患者生命。AA患者中Th1、CTL细胞活化,Treg数量及功能下降,IFN-γ和TNF-α增高,而这种现象与IL-27产生的生物学作用相一致。目前研究表明AA患者骨髓上清中IL-27的水平与AA的严重程度密切相关,疾病越严重,IL-27的水平就越高。而AA患者抗原提呈细胞的数量及功能发生改变,这种改变是否由IL-27引起?这就引导我们探究IL-27对AA患者中免疫细胞,尤其是抗原提呈细胞对T细胞应答的影响。因此,本研究的目的是探究IL-27对AA患者抗原提呈细胞的影响,主要包括树突状细胞和单核细胞的增殖与凋亡、细胞因子分泌水平、细胞因子m RNA水平的影响,阐明IL-27在AA患者抗原提呈病理机制中的作用。目的:检测IL-27对AA患者外周血中DC与单核细胞的影响。方法:(1)采用密度梯度离心法分离AA患者外周血中单个核细胞(PBMNCs),免疫磁珠分选DC与单核细胞并应用流式细胞仪检测其纯度;(2)利用CCK-8方法测定IL-27对AA患者DC与单核细胞增殖的影响;(3)Annexin V-PI法测定IL-27对DC与单核细胞凋亡的影响;(4)流式细胞术检测IL-27对AA患者DC表面共刺激分子的影响;(5)ELISA法检测IL-27对AA患者DC与单核细胞分泌的细胞因子IL-12、IL-23、IL-27的影响;(6)Real-time PCR方法测定IL-27对DC与单核细胞分泌的细胞因子IL-12、IL-23、IL-27 m RNA水平上的影响。结果:(1)IL-27能够促进AA患者外周血中DC的增殖(without IL-27组OD值为0.3009±0.0091,with 50ng/ml IL-27组OD值为0.3354±0.0077,n=8,P=0.012);(2)IL-27能够抑制AA患者外周血中DC的凋亡(without IL-27组凋亡率为51.750±2.454%,with 50ng/ml IL-27组凋亡率为41.750±2.235%,n=12,P=0.006);(3)IL-27可以上调AA患者外周血中DC表面共刺激分子CD80、CD86的表达;(4)IL-27可以促进AA患者外周血中DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等细胞因子(without IL-27组IL-12、IL-23、IL-27分泌量分别是29.000±1.042 pg/ml、60.850±3.589 pg/ml、38.580±1.018 pg/ml,with 50ng/ml IL-27组IL-12、IL-23、IL-27分泌量分别是36.950±0.869 pg/ml、79.370±3.441 pg/ml、44.710±2.138 pg/ml,P值分别为0.000、0.005、0.003);(5)IL-27可以促进AA患者DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表达(without IL-27组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表达量为1.000±0.071、1.000±0.073、1.000±0.050、1.000±0.073、1.000±0.069、1.000±0.063,with 50ng/ml IL-27组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表达量分别为1.695±0.193、1.585±0.254、2.285±0.404、1.585±0.254、4.158±0.320、1.647±0.224,P值分别是0.009、0.037、0.024、0.037、0.000、0.035);(6)不能证明IL-27促进AA患者外周血中单核细胞的增殖(without IL-27组OD值为0.2238±0.0102,with 50ng/ml IL-27组OD值为0.2435±0.0116,n=10,P=0.218);(7)IL-27能够抑制AA患者外周血中单核细胞的凋亡(without IL-27组凋亡率为42.100±3.734%,with 50ng/ml IL-27组凋亡率为27.560±2.328%,n=9,P=0.002);(8)IL-27可以促进AA患者外周血中单核细胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等细胞因子(without IL-27组IL-12、IL-23、IL-27分泌量分别是25.210±1.591pg/ml、35.540±1.728 pg/ml、26.690±1.133pg/ml,with 50ng/ml IL-27组IL-12、IL-23、IL-27分泌量分别是31.660±1.032 pg/ml、43.620±2.353pg/ml、37.440±1.640 pg/ml,P值分别为0.007、0.020、0.000);(9)IL-27可以促进AA患者单核细胞内IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表达(without IL-27组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表达量为1.000±0.082、1.000±0.075、1.000±0.067、1.000±0.075、1.000±0.061、1.000±0.069,with 50ng/ml IL-27组IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3 relative quantitive m RNA expression表达量分别为1.546±0.164、1.780±0.148、1.598±0.151、1.780±0.148、4.114±0.307、2.209±0.340,P值分别是0.046、0.001、0.004、0.001、0.000、0.009)。结论:IL-27可以促进AA患者外周血中DC的增殖,抑制其凋亡,上调DC表面的共刺激分子,刺激DC的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表达水平升高,促进DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等细胞因子;IL-27可以抑制AA患者外周血中单核细胞的凋亡,刺激单核细胞的IL-12、IL-23、IL-27 m RNA表达水平升高,并促进单核细胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等细胞因子,但不能证实IL-27可以促进单核细胞的增殖。
【关键词】：IL-27 再生障碍性贫血 树突状细胞 单核细胞
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R556.5
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 主要符号对照表12-13
• 第1章 引言13-16
• 第2章 材料与方法16-27
• 2.1 材料16-19
• 2.1.1 研究对象16
• 2.1.2 主要试剂16-17
• 2.1.3 主要仪器17-19
• 2.2 方法19-26
• 2.2.1 技术路线19
• 2.2.2 PBMNCs的分离19-20
• 2.2.3 磁珠分选单核细胞20
• 2.2.4 DC的培养20
• 2.2.5 流式细胞术检测DC的纯度20-21
• 2.2.6 CCK-8 法检测DC的增殖21
• 2.2.7 流式细胞术检测DC的凋亡21-22
• 2.2.8 流式细胞术检测IL-27对DC表面共刺激分子的影响22
• 2.2.9 RT-PCR方法检测AA患者外周血中DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27的mRNA水平22-25
• 2.2.9.1 DC总RNA提取22-23
• 2.2.9.2 逆转录制备cDNA23-24
• 2.2.9.3 cDNA的扩增24-25
• 2.2.10 ELISA法检测AA患者外周血中DC分泌细胞因子IL-12、IL-23、IL-2725-26
• 2.2.11 流式细胞术检测单核细胞的纯度26
• 2.2.12 CCK-8 法检测单核细胞的增殖26
• 2.2.13 流式细胞术检测单核细胞的凋亡26
• 2.2.14 RT-PCR方法检测AA患者外周血中单核细胞分泌的IL-12、IL-23、IL-27的mRNA水平26
• 2.2.15 ELISA法检测AA患者外周血中单核细胞分泌的细胞因子IL-12、IL-23、IL-2726
• 2.3 统计学分析26-27
• 第3章 结果27-34
• 3.1 免疫磁珠分选AA患者外周血DC后的纯度测定27
• 3.2 IL-27对AA患者外周血中DC增殖的影响27-28
• 3.3 IL-27对AA患者外周血中DC凋亡的影响28-29
• 3.4 IL-27对AA患者外周血中DC表面共刺激分子的影响29
• 3.5 IL-27对AA患者外周血中DC分泌细胞因子IL-12、IL-23、IL-27影响29-30
• 3.6 IL-27对AA患者外周血中DC分泌细胞因子IL-12、IL-23、IL-27 mRNA水平的影响30-31
• 3.7 IL-27对AA患者外周血中单核细胞增殖的影响31-32
• 3.8 IL-27对AA患者外周血中单核细胞凋亡的影响32
• 3.9 IL-27对AA患者外周血中单核细胞分泌细胞因子IL-12、IL-23、IL-27影响32-33
• 3.10 IL-27对AA患者外周血中单核细胞分泌细胞因子IL-12、IL-23、IL-27mRNA水平的影响33-34
• 第4章 讨论34-38
• 第5章 结论38-39
• 参考文献39-42
• 致谢42-44
• 综述44-52
• 参考文献50-52
• 作者简介52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李俊红;郑以州;;获得性再生障碍性贫血调节性T细胞缺陷研究进展[J];国际输血及血液学杂志;2014年04期

2 蒋白丽;李建平;李文倩;冯建明;;CD8~+ T细胞及其分泌的细胞因子在再生障碍性贫血发病机制中的作用[J];中国实验血液学杂志;2014年02期

3 刘丽华;潘晓明;单保恩;刘爽;桑梅香;刘月彩;胡晓东;;IL-27促进外周血单个核细胞来源树突状细胞分化成熟[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年01期

，

本文编号：960430