RHL抑制2k1c大鼠高血压及心脏、肾脏纤维化的研究

发布时间：2017-10-07 00:19

  本文关键词：RHL抑制2k1c大鼠高血压及心脏、肾脏纤维化的研究

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【摘要】：目的通过建立两肾一夹(two-kidney,one-clip:2k1c)肾血管性高血压大鼠的实验模型,观察2k1c大鼠心脏、肾脏纤维化的情况,探讨赖氨大黄酸(RHL)对2k1c大鼠的高血压、心脏及肾脏纤维化的作用,并进一步阐明RHL抑制大鼠心脏及肾脏纤维化的可能机制。为RHL降低肾血管性高血压、抑制心脏和肾脏纤维化的研究提供实验依据。方法1建造模型:本实验需要雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠35只,其中28只采用两肾一夹的手术方法来构建肾血管性高血压(RVH)大鼠模型,剩余7只为对照组(对照组即为假手术组)。术后四周测量各组大鼠的尾动脉收缩压(SBP),如果SBP较术前升高≥20mm Hg(1mm Hg=0.133k Pa),且高于140mm Hg为造模成功(共26只造模成功,造模成功率为93.33%)。2实验分组:对照组6只,从造模成功的26只大鼠中随机抽取24只分为模型组、赖氨酸组、大黄酸组和赖氨大黄酸组四组,每组6只。3在术后8周处死各组大鼠,并分别提取各组大鼠心脏及肾脏组织。4检测:(1)分别测量手术前、手术后4周、手术后8周时各组大鼠SBP。(2)分别测量各组大鼠的左心室的重量(LVW)、全身重量(BW)、左心室与全身体重的比值(LVW/BW),并提取心脏、肾脏组织进行下一步实验。(3)应用HE染色法观察各组大鼠心脏及肾脏的病理变化。(4)应用Masson三色染色观察各组大鼠心脏及肾脏纤维组织含量与分布。(5)应用免疫组织化学染色法观察各组大鼠心脏及肾脏中TGF-β1和CTGF因子的表达情况。(6)应用免疫荧光组织化学染色法观察各组大鼠心脏及肾脏中TGF-β1和CTGF因子的表达情况。结果1 SBP比较结果:(1)与术前比较:术后4周时的模型组及其它实验组四组大鼠的SBP均已上升40mm Hg,差异有统计学意义(P0.05),且高于140mm Hg,表明2k1c大鼠高血压模型建造成功。(2)术后8周时各组大鼠SBP比较:模型组与对照组相比,SBP明显升高,差异有统计学意义(P0.05);赖氨酸组与模型组比较,SBP无明显变化,差异无统计学意义(P0.05);赖氨大黄酸组与赖氨酸组比较,SBP明显降低,差异有统计学意义(P0.05);赖氨大黄酸组与大黄酸组比较,SBP明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。2左心室与全身体重的比值(LVW/BW)比较结果:模型组与对照组相比,LVW/BW明显升高,差异有统计学意义(P0.05);赖氨酸组与模型组相比,LVW/BW无明显变化,差异无统计学意义(P0.05);赖氨大黄酸组与赖氨酸组相比,LVW/BW明显降低,差异有统计学意义(P0.05);赖氨大黄酸组与大黄酸组相比,LVW/BW稍降低,差异有统计学意义(P0.05)。3 HE染色:结果显示,对照组大鼠的心肌及肾脏基本正常,无明显病理变化;模型组与对照组相比,大鼠心脏及肾脏可观察到纤维化程度增加;赖氨酸组与模型组相比,大鼠心脏及肾脏纤维化程度无明显变化;赖氨大黄酸组与赖氨酸组的比较,心脏及肾脏纤维化程度有所减轻。赖氨大黄酸组与大黄酸组相比,心脏及肾脏纤维化程度有所减轻。4Masson三色染色:模型组与对照组比较,大鼠心脏及肾脏组织中纤维含量显著增多(P0.05);赖氨酸组与模型组比较,大鼠心脏及肾脏组织纤维含量无明显差别(P0.05);经RHL治疗后,大鼠心脏及肾脏组织中纤维含量显著减少(P0.05);与大黄酸组比较,RHL组较大黄酸组纤维含量明显减少(P0.05)。5免疫组织化学染色:结果显示,对照组的心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF轻微表达;模型组与对照组比较,大鼠心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF表达增强(P0.05);赖氨酸组与模型组比较,大鼠心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF的表达无明显差异(P0.05);赖氨大黄酸组与赖氨酸组比较,大鼠心脏及肾脏TGF-β1及CTGF表达明显减轻(P0.05);赖氨大黄酸组与大黄酸组比较,大鼠心脏及肾脏TGF-β1及CTGF表达明显减轻(P0.05)。6免疫荧光组织化学染色:结果显示,对照组的心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF轻微表达;模型组与对照组比较,大鼠心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF表达增强(P0.05);赖氨酸组与模型组比较,大鼠心脏及肾脏的TGF-β1及CTGF的表达无明显差异(P0.05);赖氨大黄酸组与赖氨酸组比较,大鼠心脏及肾脏TGF-β1及CTGF表达明显减轻(P0.05);赖氨大黄酸组与大黄酸组比较,大鼠心脏及肾脏TGF-β1及CTGF表达明显减轻(P0.05)。结论1 2k1c高血压大鼠模型建造成功,术后8周时可以导致大鼠心脏及肾脏纤维化增强。2赖氨大黄酸可以明显降低两肾一夹大鼠的高血压。3赖氨大黄酸可以减轻2k1c大鼠心脏及肾脏的纤维化程度。4 2k1c高血压大鼠的心脏及肾脏中的TGF-β1、CTGF因子表达增多,赖氨大黄酸能部分地抑制它们的过度表达,赖氨大黄酸可能通过抑制TGF-β1、CTGF的表达来降低心脏及肾脏纤维化的程度。
【关键词】：赖氨大黄酸 两肾一夹 TGF-β1 CTGF 心肌纤维化
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1;R692
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略表11-12
• 引言12-13
• 第1章 RHL抑制两肾一夹大鼠的高血压及其导致的心肌、肾脏纤维化的研究13-55
• 1.1 实验动物、试剂和仪器13-14
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 实验试剂13
• 1.1.3 实验仪器13-14
• 1.2 试验方法14-25
• 1.2.1 动物饲养14
• 1.2.2 实验大鼠两肾一夹的模型制作14-15
• 1.2.3 实验动物分组及给药方法15
• 1.2.4 大鼠血压与体重的测定15-16
• 1.2.5 大鼠肾脏及心脏的提取16
• 1.2.6 大鼠HE染色检测心脏组织病理学改变16-17
• 1.2.7 大鼠HE染色检测肾脏组织病理学改变17
• 1.2.8 大鼠Masson染色检测心脏组织纤维化改变17-18
• 1.2.9 大鼠Masson染色检测肾脏组织纤维化改变18-19
• 1.2.10 大鼠免疫组织化学染色（immunohistochemical staining，IHC）检测心脏组织中TGF-β1 的表达19-20
• 1.2.11 大鼠免疫组化检测心脏组织中CTGF的表达20
• 1.2.12 大鼠免疫组化检测肾脏组织中TGF-β1 的表达20-21
• 1.2.13 大鼠免疫组化检测肾脏组织中CTGF的表达21-22
• 1.2.14 大鼠免疫荧光组织化学染色（Immunofluorescence staining，IF）检测心脏组织中TGF-β1 的表达22-23
• 1.2.15 大鼠免疫荧光检测心脏组织中CTGF的表达23
• 1.2.16 大鼠免疫荧光检测肾脏组织中TGF-β1 的表达23-24
• 1.2.17 大鼠免疫荧光检测肾脏组织中CTGF的表达24
• 1.2.18 统计分析24-25
• 1.3 结果25-45
• 1.3.1 各组大鼠术前血压结果25-26
• 1.3.2 各组大鼠术后4周时血压结果26-27
• 1.3.3 各组大鼠术后8周时血压结果27-28
• 1.3.4 赖氨大黄酸对大鼠左心室与全身体重比值的影响28-29
• 1.3.5 各实验组大鼠心脏组织HE染色结果29-30
• 1.3.6 各实验组大鼠肾脏组织HE染色的表达结果30-31
• 1.3.7 各实验组大鼠心脏Masson染色结果31-33
• 1.3.8 各实验组大鼠肾脏Masson染色结果33-34
• 1.3.9 各实验组大鼠心脏组织中TGF-β1 免疫组化的表达结果34-35
• 1.3.10 各实验组大鼠心脏组织中CTGF免疫组化的表达结果35-37
• 1.3.11 各实验组大鼠肾脏组织TGF-β1 免疫组化的表达结果37-38
• 1.3.12 各实验组大鼠肾脏组织CTGF免疫组化的表达结果38-39
• 1.3.13 各实验组大鼠心脏组织中TGF-β1 免疫荧光的表达结果39-41
• 1.3.14 各实验组大鼠心脏组织中CTGF免疫荧光的表达结果41-42
• 1.3.15 各实验组大鼠肾脏组织TGF-β1 免疫组化的表达结果42-43
• 1.3.16 各实验组大鼠肾脏组织CTGF免疫荧光的表达结果43-45
• 1.4 讨论45-51
• 1.4.1 肾性高血压动物模型的建立45-46
• 1.4.2 高血压对心脏及肾脏的影响46-47
• 1.4.3 赖氨大黄酸对两肾一夹高血压的大鼠的血压的影响47-48
• 1.4.4 赖氨大黄酸对肾性高血压大鼠的肾脏抗纤维化的作用48-50
• 1.4.5 赖氨大黄酸对肾性高血压大鼠的心脏抗纤维化的作用50-51
• 1.5 小结51
• 参考文献51-55
• 第2章 综述 心肌纤维化模型的研究进展55-70
• 2.1 心肌纤维化的发病机制55-58
• 2.1.1 心肌纤维化与肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）56
• 2.1.2 调节心肌纤维化的细胞因子56-57
• 2.1.3 心肌纤维化与氧化应激和炎性因子57-58
• 2.1.4 心肌纤维化与血管内皮功能障碍及其衍生物的分泌失调58
• 2.1.5 心肌纤维化与细胞内钙离子58
• 2.2 心肌纤维化模型58-64
• 2.2.1 遗传型心肌纤维化模型59
• 2.2.2 基因工程型心肌纤维化模型59
• 2.2.3 环境型心肌纤维化模型59-60
• 2.2.4 手术型心肌纤维化模型60-62
• 2.2.5 药物型心肌纤维化模型62
• 2.2.6 病毒型心肌纤维化模型62-63
• 2.2.7 免疫损伤型心肌纤维化模型63-64
• 2.3 心肌纤维化模型的评价方法64-65
• 2.3.1 病理学检查64-65
• 2.3.2 心功能检查65
• 2.3.3 血清学检查65
• 2.4 小结65-66
• 参考文献66-70
• 结论70-71
• 致谢71-72
• 导师简介72-73
• 作者简介73-74
• 学位论文数据集74

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