NF-κB、ELAM-1在小梁网细胞氧化损伤中的表达及干预研究

发布时间：2017-10-14 04:22

  本文关键词：NF-κB、ELAM-1在小梁网细胞氧化损伤中的表达及干预研究

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【摘要】：目的：本实验利用α-硫辛酸(α-LA)干预氧化应激下的大鼠小梁网细胞,观察小梁网细胞的形态变化,检测核转录因子-κB (NF-κB)、内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)的表达,探讨氧化应激、NF-κB、ELAM-1在原发性开角型青光眼(POAG)发病机制中的作用,以及α-LA对小梁网细胞的保护机制。 方法：原代培养大鼠小梁网细胞,免疫组化法鉴定。取传至第三代的细胞按2×10S/ml消化传入6孔板,血清饥饿过夜。随机分为五组：A组为正常对照组,加入不含药物的无血清培养基；B组为单纯H2O2损伤组,加入等量含800μM H2O2的无血清培养基；C组为α-LA干预组,按照给予α-LA浓度的不同分为C1、C2、C3三个亚组,加入等量含800μM H2O2以及浓度依次为100μM、500μM、1000μM的α-LA的无血清培养基。将各组细胞均置于5%CO2培养箱中37℃培养2h。光学显微镜下观察细胞形态变化,免疫组化法和Real-time PCR法检测并比较各组NF-κB、ELAM-1表达的变化。 结果： 1.利用消化法成功培养出大鼠小梁网细胞,原代细胞呈三角形、梭形或不规则形,10～14天融合成旋涡状单层细胞,传至第三代后细胞形态稳定,梭形,胞浆丰富,颗粒多,可见较多突起及分支。取传至第三代的细胞行Anti-LN、Anti-FN、Anti-NSE免疫组化染色鉴定,见细胞质呈棕黄色阳性颗粒,阴性对照不着色,符合小梁网细胞的特性。 2.与A组相比,B组小梁网细胞突起减少,细胞回缩,间隙扩大,细胞数量减少；而C组随着α-LA浓度的增加,细胞形态改变与A组相比逐渐趋于不明显。 3.五组小梁网细胞NF-κB表达有显著统计学差异(F=426.515,P=0.000)。A组小梁网细胞质中少量表达NF-κB;B组NF-κB大量活化进入细胞核,表达量较A组明显升高(p=0.000)；C组中NF-κB在胞质、胞核中均有表达,且与B组相比,NF-κB mRNA表达量降低(p分别为0.036、0.000、0.000)；C2、C3两组与C1组相比明显降低(p=0.000)；C2、C3两组间比较无明显差异(p=0.204)；C2组与A组相比仍偏高(p=0.016),但C3组与A组相比无明显统计学差异(p=0.155)。 4.五组小梁网细胞ELAM-1均表达在细胞质,且表达量有显著统计学差异(F=96.409,P=0.000)。A组少量表达ELAM-1mRNA; B组较A组表达明显升高(p=0.000)；C组较B组表达均明显降低(p分别为0.016、0.000、0.000)；随着a-LA浓度的增加,C1、C2、C3三组ELAM-1mRNA的表达量逐渐下降,两两比较均有显著统计学差异(p均为0.000)；C3组与正常组相比仍然偏高(p=0.004)； 结论： 1.氧化应激产生的氧自由基可通过活化NF-κB,进一步激活ELAM-1的转录,导致小梁网细胞形态改变、细胞丢失； 2. ELAM-1可能通过包括NF-κB在内的多种途径激活,影响小梁网细胞的形态和功能； 3.α-LA可通过抑制NF-κB的活化,进一步减少ELAM-1的表达,减轻氧化应激对小梁网细胞的损害； 4.α-LA对NF-κB以及ELAM-1表达的抑制与α-LA呈浓度依赖性,1000μM的α-LA可阻断由800μM H2O2诱导的小梁网细胞中NF-κB的激活,但不能完全阻断ELAM-1表达的上调。
【关键词】：小梁网细胞 氧化应激 NF-κB ELAM-1 α-硫辛酸
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R775.2
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一部分 小梁网细胞的培养及鉴定9-17
• 材料和方法9-11
• 结果11-13
• 讨论13-14
• 参考文献14-17
• 第二部分 NF-κB、ELAM-1在小梁网细胞氧化损伤中的表达及α-LA对小梁网细胞的保护作用17-34
• 材料和方法17-21
• 结果21-27
• 讨论27-31
• 参考文献31-34
• 全文结论34-35
• 综述35-44
• 参考文献40-44
• 攻读学位期间的研究成果44-45
• 致谢45-46

【参考文献】

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本文编号：1028974