利用多重单碱基引物延伸法检测耳聋基因热点突变

发布时间：2017-10-29 15:11

  本文关键词：利用多重单碱基引物延伸法检测耳聋基因热点突变

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【摘要】：背景：听觉系统中外耳、中耳、内耳结构异常及听觉传导信号通路中的听神经和各级中枢发生病变,导致听功能障碍,表现出不同程度的听力下降,统称为耳聋。我国听力残疾人数众多,每年有3万左右聋儿出生,发病率为1/500～1/1000。60%的耳聋患者是遗传因素所导致的,遗传性聋中非综合征型耳聋占70%,30%为综合征型耳聋。迄今已经定位的非综合征型耳聋基因座约有136个,已克隆基因88个。虽然耳聋具有较高的遗传异质性,但大部分非综合征型耳聋由少数几个基因热点突变引起,包括GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体基因(mtDNA12SrRNA)等,这使遗传性耳聋的基因诊断和筛查成为可能。传统的耳聋基因检测方法包括限制性片段长度多态性分析、限制性内切酶酶切指纹-单链构象多态性分析、变性高效液相色谱法、实时荧光定量Taqman MGB探针法、PCR结合Sanger测序、高分辨率熔解曲线法等。但是这些方法很难同时对不同基因上的多个突变位点进行检测。基因芯片技术虽然能同时对多基因、多位点进行检测,但是成本昂贵,对技术要求高。因此,建立一种能一次性检测多个热点突变、可靠、经济、快速的技术尤为重要。 目的：采用多重单碱基引物延伸法对耳聋先证者进行GJB2、 GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12个热点突变位点的一次性检测,以期建立一种快速、可靠、经济的耳聋基因诊断方法。 方法：采用多重单碱基引物延伸法对96名非综合征型耳聋先证者、66名家系成员及50名正常人,共212名,进行GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12个热点突变位点的一次性检测,并采用Sanger测序进行验证。 结果：1、采用多重单碱基引物延伸法对96名非综合征型耳聋先证者、66名家系成员及50名正常人,共212名,进行GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12个热点突变位点的一次性检测,结果与Sanger测序结果一致,准确性为100%。2、采用多重单碱基引物延伸法对96名非综合征型耳聋先证者进行GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA基因12个热点突变位点的一次性检测,大大提高了检出率,检出率为41.67%,而前期单个基因／单个位点的一次性检出率只有31.25%。3、50名正常人中有1名携带GJB2c.235delC,正常人中携带率为2%,与国内研究显示的正常人群携带率在1%～6%之间相符。 结论：建立了一种可以一次性检测非综合征型耳聋GJB2、GJB3、 SLC26A4、12SrRNA基因12个热点突变位点的快速、可靠、经济的基因诊断方法。
【关键词】：非综合征型耳聋 多重单碱基引物延伸法 热点突变
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 目录9-10
• 主要实验仪器、试剂与耗材10-13
• 英文~.略词简表13-14
• 前言14-18
• 1 研究对象18-19
• 2 研究方法19-27
• 2.1 外周血基因组DNA(gDNA)提取19
• 2.2 96个先证者前期基因检测19
• 2.3 多重单碱基引物延伸19-25
• 2.4 Sanger测序验证25-26
• 2.5 正常对照人群筛查26-27
• 3 实验结果27-44
• 3.1 96个先证者前期基因检测结果27-31
• 3.2 多重单碱基引物延伸结果31-44
• 4 讨论44-51
• 4.1 多重单碱基引物延伸法在基因分型中的应用44-45
• 4.2 非综合征型遗传性耳聋突变位点的选择45-46
• 4.3 多重单碱基引物延伸结果讨论46-49
• 4.4 耳聋检测技术的展望49-51
• 5 结论51-52
• 参考文献52-57
• 综述57-79
• 参考文献73-79
• 在读期间主要研究成果79-80
• 致谢80

【共引文献】

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本文编号：1113493