CK13基因反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响

发布时间：2017-11-03 14:33

本文关键词：CK13基因反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响

【摘要】：目的：本文探讨CK13基因反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响。采用慢病毒载体介导转染方法,将携带CK13反义寡核苷酸的CK13质粒和空载体质粒(pEGFP-N1)转染至HNE1细胞中,分析研究CK13基因对细胞周期的影响及对鼻咽癌的放射效果,探索一种安全、有效的鼻咽癌治疗新策略,以期在鼻咽癌治疗方面获得突破性进展。方法： 1、目的基因的制备：合成CK13反义寡核苷酸片段；重组DNA;转染；筛选。 2、携带CK13基因反义核苷酸片段的质粒CK13和空载体质粒(pEGFP-N1)的转化、扩增、酶切与测序鉴定分析。 3、慢病毒介导,将CK13反义核苷酸,空载体质粒pEGFP-N1转染至HNE1细胞中。分别命名为Anti-CK13组、lenti virus组以及未转染的HNE1鼻咽癌细胞株命名为control组。应用RT-qPCR, Westen blotting等分子生物学方法测定细胞内目的基因的表达。 4、克隆形成实验测定细胞剂量存活分数,采用线性二次函数模型(L-Q模型)和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线,分别求出三组的放射生物学参数。 5、体外观察放射治疗对转染细胞的杀伤作用。结果： 1、鼻咽癌HNE1细胞培养状况良好,设计出的CK13反义序列包含了合理的反义寡核苷酸序列——5' CACCTCCATAGCCACCTCCA3',对于细胞内CK13的沉默起到重要作用。 2、携带CK13反义寡核苷酸的质粒CK13和空载体质粒(pEGFP-N1)满足实验要求。qPCR结果显示,感染CK13反义序列的HNE1细胞的CK13的mRNA水平相对于正常的HNE1细胞表达水平为其0.284倍,表达明显降低,差异具有显著性(P0.05)。 3、单击多靶模型和线性二次函数拟合辐射剂量存活曲线结果表明,转染反义CK13基因后,D0、Dq、SF2均增加,α值、α/β均减小,说明CK13基因的沉默降低了HNE1细胞的放射敏感性。X线照射后,空白细胞组和阴性对照组的各组放射生物学参数均相似,说明两组细胞的放射敏感性无显著性变化。而在相同放射剂量下,与转染空载体和空白细胞相比,转染反义CK13基因后的细胞存活分数升高；吉姆萨染色后统计各组细胞形成克隆情况,结果表明,转染反义CK13组的克隆形成数和形成率明显大于空质粒组和空白细胞组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论： CK13基因反义寡核苷酸能明显降低鼻咽癌HNE1细胞株的放射敏感性。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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