1,25二羟维生素D3对穿透性角膜移植小鼠T淋巴细胞的实验研究

发布时间：2017-11-03 15:11

  本文关键词：1,25二羟维生素D3对穿透性角膜移植小鼠T淋巴细胞的实验研究

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【摘要】：目的 本研究旨在探讨1，25二羟维生素D3对穿透性角膜移植联合皮肤移植模型小鼠免疫排斥反应的影响，进一步探讨1，25二羟维生素D3对小鼠免疫系统T淋巴细胞的调节作用。 方法 实验以C57BL/6小鼠为受体，以Balb/c小鼠为供体，按照完全随机分组设计将实验分成对照组、移植组和干预组。建立小鼠穿透性角膜移植联合皮肤移植的动物模型，干预组小鼠隔日腹腔注射溶解于1，25二羟维生素D3的花生油，，剂量为10ng，移植组和对照组小鼠隔日腹腔注射同等剂量的生理盐水。手术后每天在裂隙灯下观察角膜植片的情况，肉眼下观察皮肤植片的情况。 在移植术后的第13天，取三组小鼠外周血，行流式检测外周血中γδT淋巴细胞和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的差异性，探讨1，25二羟维生素D3对这两种细胞的调节作用。 移植术后第13天，称重后处死三组小鼠，然后取三组小鼠的脾脏，称重后计算脾脏/体重百分比，然后用淋巴细胞分离液获取脾脏淋巴细胞，采用Trizol法提取淋巴细胞总RNA后进行逆转录过程，然后进行荧光定量聚合酶链反应，观察三组小鼠脾脏淋巴细胞中Th1相关的细胞因子IFN-γmRNA和IL-2mRNA，Th2相关的IL-10mRNA，Th17相关的IL-17AmRNA的表达的差异性，推断1，25二羟维生素D3对各种细胞因子的调节作用。 统计学分析：所有的实验数据均以均数±标准差来表示，应用SPSS19.0进行方差分析，P＞0.05认为差异无统计学意义，P＜0.05则认为差异有统计学意义。 结果 1，25二羟维生素D3干预组小鼠的角膜植片和皮肤植片的生存时间较移植组要长，移植物小鼠的外周血中γδT细胞的比例明显高于对照组和干预组，干预组小鼠γδT细胞的比例高于对照组，1，25二羟维生素D3对小鼠外周血的γδT细胞具有一定的下调作用，移植组小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞明显低于对照组和干预组，干预组小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例高于对照组，1，25二羟维生素D3对CD4+CD25+调节性T细胞具有一定的上调的作用。就脾脏淋巴细胞而言，移植组Th1相关的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表达高于对照组和干预组，干预组高于对照组，移植组Th17相关的IL-17AmRNA的表达高于对照组和干预组，干预组高于对照组，干预组Th2相关的IL-10mRNA的表达高于移植组和对照组，干预组高于移植组，三组之间的差异具有统计学意义。1，25二羟维生素D3可以下调脾脏淋巴细胞中Th1相关的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表达，下调Th17相关的IL-17AmRNA的表达，上调Th2相关的IL-10mRNA的表达。 结论 这些结果说明1,25二羟维生素D3可能对小鼠同种异体角膜移植的免疫排斥反应具有抑制作用，通过上调对免疫排斥反应具有抑制作用的CD4+CD25+调节性T细胞的数量，下调对免疫排斥反应具有促进作用的γδT细胞的比例。1，25二羟维生素D3对促进炎症反应相关的细胞因子IFN-γmRNA、IL-2mRNA和IL-17AmRNA的表达具有抑制作用，1，25二羟维生素D3对抑制炎症反应相关的细胞因子IL-10mRNA的表达具有上调作用。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R779.65

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本文编号：1136718