Slit2基因转染对人视网膜色素上皮细胞VEGF表达的影响及其作用机制

发布时间：2017-11-13 00:06

  本文关键词：SLIT2基因转染对人视网膜色素上皮细胞VEGF表达的影响及其作用机制

  更多相关文章： Slit基因 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶 细胞外信号调节蛋白激酶 血管内皮生长因子

【摘要】：目的:研究Slit2基因对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,并探讨丝裂原激活(mitogen-activated,MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)这2条信号通路在此过程中的作用。方法:(1)体外培养人RPE细胞株RPE-19;(2)将腺病毒介导的Slit2(adenovirus-mediated Slit2,Ad-Slit2)转染RPE细胞,培养12、24 h及48 h;(3)转染前将MEK信号通路阻断剂PD98059、PI3K信号通路阻断剂LY294002预处理RPE细胞1 h;(4)用real-time PCR及酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测VEGF的表达水平,用Western blot检测磷酸化ERK、磷酸化AKT的表达情况。结果:Slit2转染的RPE细胞后,real-time PCR结果显示不同时间之间VEGF m RNA表达有差别(F=12.789,P=0.018),组别和时间之间存在交互作用(F=13.375,P=0.017),不同组别有差别(F=16.855,P=0.015),在24 h与48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P24 h=0.002,P48 h=0.018)。ELISA结果显示不同时间之间VEGF蛋白表达有差别(F=24.886,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=23.524,P=0.000),不同组别有差别(F=28.250,P=0.006),在48 h,Ad-Slit2组高于空腺病毒组(P=0.003)。Western blot结果可见p-ERK及p-AKT的蛋白表达水平增加,阻断剂PD98059及LY294002分别能降低ERK、AKT的磷酸化水平,并与Ad-Slit2组相比较,real-time PCR结果显示VEGF m RNA表达水平在不同时间有差别(F=32.202,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=8.372,P=0.006);不同组别存在差别(F=15.062,P=0.001),ELISA结果显示VEGF蛋白表达水平在不同时间之间有差别(F=90.703,P=0.000),组别和时间之间存在交互作用(F=4.968,P=0.005),不同组别存在差别(F=69.636,P=0.000)。结论:PI3K/AKT以及MEK/ERK这两条信号通路参与了Slit2所诱导的RPE细胞中VEGF表达水平增加。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第二医院眼科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81170858)
【分类号】：R773.4
【正文快照】： 眼底新生血管是多种眼底疾病所导致的并发症,常引起严重的视力障碍[1]。眼底新生血管的发生主要是由于促进因子和抑制因子动态平衡失调而导致,在这些因子中,血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)作为一种很强的内皮细胞有丝分裂原,具有内皮细胞高度特异

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 黄莉芸;周希瑗;;腺病毒介导的slit2 shRNA对缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响[J];中国生物制品学杂志;2014年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 汤艳玲;周希瑗;;腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人RPE细胞对人脉络膜微血管内皮细胞增殖的影响[J];重庆医科大学学报;2014年11期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陈军;于东风;刘弋;杨锦雷;;Slit2/Robo1蛋白在直肠癌中的表达及与微血管密度的关系[J];安徽医药;2011年06期

2 季锐;卢雪峰;付金栋;姜旭生;雒燕;杨淑萍;;Slit2和Robo1蛋白表达与胃癌关系的临床研究[J];中国现代普通外科进展;2008年02期

，

本文编号：1178193