DEPDC1基因在鼻咽癌中作用的初步研究

发布时间：2017-11-30 12:23

  本文关键词：DEPDC1基因在鼻咽癌中作用的初步研究

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【摘要】：目的： DEPDC1基因是新发现的肿瘤相关基因，位于染色体1p31.2，全长约23Kb，编码分子量为93kd和61kd大小的两种蛋白质。已有研究表明DEPDC1在膀胱癌、乳腺癌、肺腺癌等恶性肿瘤中呈现过表达，，而在除睾丸以外的其他24种正常组织(如肺、卵巢、肾等)中未发现阳性表达。通过现仅有的几篇文献报道，表明此基因可能为一新的癌基因，与细胞增殖、凋亡、周期、分化等有密切关系。但到目前为止，其在鼻咽癌中的作用未见研究报道。我们在前期实验研究中发现DEPDC1基因在鼻咽癌组织中的表达量明显高于正常鼻咽部组织，本研究旨在此基础上，对DEPDC1基因在鼻咽癌中的作用进行初步探讨和分析，为鼻咽癌的临床治疗提供实验基础和理论依据。 方法： （1）沉默DEPDC1基因对鼻咽癌细胞系HNE-1、CNE-1生长、凋亡、周期的影响：根据siRNA靶序列设计原则和方法，设计针对DEPDC1基因的siRNA序列，并转染入HNE-1、CNE-1细胞，分别在mRNA和蛋白质水平检测DEPDC1基因表达量。通过倒置显微镜观察细胞形态变化，流式细胞术检测两种细胞的凋亡和周期变化。采用MTS、平板克隆实验检测细胞的生长增殖情况。 （2）DEPDC1基因表达下调对细胞系HNE-1生长、凋亡、周期影响的机制研究：采用荧光定量PCR检测HNE-1细胞中NF-κB通路的相关细胞因子的变化情况。同时采用荧光定量PCR和蛋白印迹检测HNE-1中细胞分子CCNB1的变化。 结果： （1）通过PCR及Western Blot检测显示设计合成的siRNA可有效抑制DEPDC1基因的表达。细胞系HNE-1、CNE-1均出现明显的细胞形态改变，细胞生长增殖受抑，细胞凋亡明显增加，细胞周期阻滞于G2/M期。 （2）荧光定量PCR检测HNE-1细胞，结果显示NF-κB通路中多个肿瘤相关细胞因子出现变化。即抑制NF-κB激活的A20基因表达量明显上调，受NF-κB调控的肿瘤相关靶基因的表达量下降，包括C-MYC、BCL-2、MMP9、ICAM-1基因。与细胞周期密切相关的CCNB1分子的表达在mRNA水平无明显变化。在蛋白水平，其表达量上升。 综上，本研究发现，沉默DEPDC1基因，导致鼻咽癌细胞系HNE-1和CNE-1出现细胞增殖受抑、凋亡增加、周期阻滞，其可能的机制为NF-κB通路被抑制，CCNB1蛋白降解延迟、减少所致。以上研究结果对于今后进一步深入探讨DEPDC1基因在鼻咽癌发生发展中的作用机制及促进以DEPDC1为靶点的临床抗癌药物的研究具有重要意义。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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1 郝海波;许培权;;抑癌基因p16与恶性肿瘤关系的研究进展[J];蚌埠医学院学报;2012年03期

2 张利能,俞强,查锡良;PTEN基因诱导人胚肾293细胞凋亡和细胞周期停滞[J];生物化学与生物物理进展;2003年02期

3 赵蔚然;许峰;;NF-kB与肿瘤生成[J];西部医学;2010年09期

4 秦丽莉;樊飞跃;詹启敏;;Cyclin B1在细胞周期调控及肿瘤发生发展中的作用[J];医学研究杂志;2008年01期

5 王晓江;廖之君;林德馨;;DEP结构域的功能研究进展[J];医学综述;2011年12期

本文编号：1239302