10-23脱氧核酶沉默Survivin基因诱导HLECs凋亡的实验研究

发布时间：2017-12-15 11:20

  本文关键词：10-23脱氧核酶沉默Survivin基因诱导HLECs凋亡的实验研究

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【摘要】：目的：设计针对Survivin mRNA序列的特异性10-23脱氧核酶（10-23DNAzyme），通过脂质体介导Survivin基因特异性10-23DNAzyme转染到人晶状体上皮细胞（HLECs）SRA01/04细胞珠，探讨沉默Survivin基因对Survivin mRNA表达及HLECs凋亡的影响，为后发性白内障的预防及治疗提供实验依据及新方法。方法：体外培养HLECs永生系SRA01/04，将细胞分为3组，空白对照组：HLECs+完全培养基；阴性对照组：HLECs+脂质体+非特异性10-23DNAzyme；实验组：HLECs+脂质体+特异性10-23DNAzyme。利用反义技术，以脂质体为载体分别将特异及非特异10-23DNAzyme转染至HLECs内，HLECs转染24h及48h后，采用倒置相差显微镜观察HLECs的生长状态及HLECs的形态改变。HLECs转染48h后，运用RT-PCR联合灰度扫描半定量方法检测HLECs中Survivin mRNA的表达情况，运用流式细胞仪（FCM）联合膜联蛋白V/PI(Annexin V/PI）双染法来检测HLECs的凋亡率。结果：运用倒置相差显微镜观察，转染24h后空白对照组、阴性对照组的HLECs细胞呈椭圆形或类圆形，均匀分散贴于培养瓶底，细胞的胞体无色透亮，胞浆丰富，细胞内含有粗细不一致的及排列紧凑的颗粒，少部分细胞胞体伸出凸起，与其它细胞凸起相连。48h后，细胞增多，细胞间隙减小，胞体伸出的凸起变少，呈类圆形。实验组的HLECs转染24h后，细胞开始变圆，染色质凝聚，胞质浓缩；转染48h后，部分细胞已经裂解成形态不一类圆形的凋亡小体，有的细胞已经脱离培养瓶底，漂浮在培养液中。转染48h后RT-PCR法联合灰度扫描半定量检测结果示：在空白对照组、阴性对照组及实验组中，HLECs的Survivin mRNA相对表达量分别为：0.726±0.148、0.700±0.115及0.314±0.130。实验组Survivin mRNA的相对含量分别和空白对照组及阴性对照组相比较，分别降低了56.75%和55.14%，差异具有明显统计学意义（P=0.0000.05）。空白对照组及阴性对照组的Survivin mRNA的相对含量相比较无统计学差异（P=0.0550.05）。流式细胞仪联合V/PI双染色法结果显示：HLECs转染48h后，空白对照组HLECs凋亡率为2.33±0.23％，阴性对照组HLECs凋亡率为3.57±0.20％，两组细胞之间HLECs凋亡率差异无统计学意义（P=0.0720.05）。实验组HLECs凋亡率为19.52±1.16％，与空白及阴性对照组相比较，实验组HLECs的凋亡率明显增加，二者之间的差异具有统计学意义（P=0.0000.05）。结论：特异性10-23DNAzyme可以有效沉默Survivin基因，，抑制HLECs中surivivn mRNA的表达；HLECs中Survivin基因表达下调可促进HLECs凋亡。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R776.1

【参考文献】

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本文编号：1291779