PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究

发布时间：2017-12-27 19:09

  本文关键词：PET滤膜用于承载耳蜗基底膜培养的实验研究　出处：《中华耳科学杂志》2015年01期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的探讨一种适宜耳蜗组织贴壁培养的方法。方法 PET滤膜预先置入层粘连蛋白、鸟氨酸、胎牛血清按2:2:1比例混合均匀的液体中在4℃预孵过夜,选取出生四天的C57BL/6J小鼠作为研究对象。剥取基底膜以PET滤膜作为承载介质培养在加入含青霉素的培液中,48小时后收取样本,进行免疫荧光(一抗goat anti-otoancorin、mouse anti-beta tubu-linⅢ及对应二抗采用cy3 donkey anti goat,647 donkey anti mouse,染核试剂DAPI,phalloidin)观察不同部位细胞,扫描电镜及制备原位超薄切片透射电镜观察体外培养新生小鼠基底膜内外毛细胞、螺旋缘内细胞、螺旋神经元细胞显微结构的改变。结果耳蜗基底膜在PET膜上贴附生长良好。各种细胞的微小结构和超微结构保持正常状态。结论 PET滤膜能作为一种新颖的承载基底膜培养的介质。
[Abstract]:Objective to explore a suitable method for the cultivation of the cochlear tissue. Methods the PET membrane was pre implanted with laminin, ornithine and fetal bovine serum in a uniform mixture of 2:2:1 ratio and incubated at 4 C for the night. C57BL/6J mice, who were born on the four day, were selected as the research subjects. Stripping the basement membrane with PET membrane as the bearer of culture media in culture medium containing penicillin in 48 hours after receiving samples for immunofluorescence (goat anti-otoancorin, mouse anti-beta, anti tubu-lin and anti Cy3 III corresponding to two by donkey anti goat, 647 donkey anti mouse staining reagent DAPI, phalloidin) were observed in different parts cells were prepared by in situ scanning electron microscope and transmission electron microscope mice were cultured in the basement membrane and inner hair cells, spiral limbus cells and spiral ganglion cell changes in the microstructure of in vitro. Results the epiphytic length of the cochlear basement membrane was attached to the PET membrane. The microstructures and ultrastructures of all kinds of cells remained normal. Conclusion PET filter membrane can be used as a novel medium for bearing basement membrane culture.
【作者单位】： 南京大学医学院附属鼓楼医院耳鼻咽喉头颈外科;
【基金】：江苏省自然科学基金资助(项目号BK2010104)
【分类号】：R764
【正文快照】： 目前耳蜗体外培养常用的方法是组织贴壁培养法,介导贴壁常用的方法有鼠尾胶包被培养皿[1,2]和鼠尾胶凝胶液滴法[3]。两种培养方法基底膜都能存活良好,但都有各自的优缺点。在实验过程中我们发现了一种新颖的承载基底膜培养的方法,能同时结合现有两种方法的优点。用Millicell中

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1342819