体外转染抑癌基因P27对人眼球筋膜囊成纤维细胞抑制作用的研究

发布时间：2018-02-23 17:49

本文关键词： 抑癌基因P27 人眼球筋膜囊成纤维细胞基因转染　出处：《大连医科大学》2010年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 目的：青光眼是一组以视神经凹陷性萎缩和视野缺损为共同特征的疾病,其致盲率已居于第二位。目前滤过手术是治疗青光眼术式中最常用的一种。但青光眼滤过术后2年内失败率为15-25%,其主要原因为手术区成纤维细胞的增殖,细胞外间质的合成,胶原沉积,以及继之发生的结膜下组织纤维化,使手术形成的滤过道瘢痕化,从而使滤过泡功能减退,最终导致手术失败。为抑制滤过道的瘢痕形成,常将能抑制瘢痕形成的药物应用于滤过性手术,以期延缓或抑制滤过道的瘢痕形成,提高手术成功率。目前临床上常用的抗瘢痕化药物主要有5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C等,它们对细胞的增殖都有一定的抑制作用,但是其抑制作用缺乏靶向性。这些药物对细胞的增殖虽有不同程度的抑制,但因其有各种不可避免的毒副作用,故在临床上的应用存在一定程度的受限。抑癌基因P27为细胞周期素依赖性激酶抑制剂,为控制细胞周期由G1-S期转换的关键。本实验将探讨阳离子脂质体介导的抑癌基因P27对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的抑制作用,为临床上基因治疗青光眼滤过术后瘢痕化提供理论依据。方法：体外培养原代人眼球筋膜囊成纤维细胞,免疫组化鉴定,传至第三代用于实验。采用阳离子脂质体介导的方法,将构建的PEGFP-N1 P27真核表达质粒转染体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞,同时以重组质粒PEGFP-N 1作为空质粒转染组,体外培养的成纤维细胞作为空白对照组。以流式细胞仪行细胞周期分析,MTT法检测抑癌基因P27对成纤维细胞的作用。结果：转染P27抑癌基因组的细胞周期大都处于G0-G1期,转染PEGFP-N 1空质粒组和空白对照组的细胞周期大都处于S期,转染的P27抑癌基因可使细胞周期停滞于G1期,明显抑制成纤维细胞的增殖。结论：转染的抑癌基因P27对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖具有抑制作用。
[Abstract]:Objective : glaucoma is a group of diseases with common characteristics of optic nerve depression and visual field defect . The blindness rate has been in the second place . Methods : The cultured human eyeball fascia balloon fibroblasts were cultured in vitro . The eukaryotic expression plasmid of PEGFP - N1 was transferred to the third generation . The recombinant plasmid PEGFP - N1 was used as the empty plasmid transfection group , and the cultured fibroblasts were used as blank control group . Results : The cell cycle of the transfected cell cycle was in G0 - G1 phase , and the cell cycle of transfected PEGFP - N 1 empty plasmid group and blank control group was mostly in S phase . Conclusion : The inhibitory effect of transfected tumor suppressor gene on proliferation of human eyeball fascia fibroblasts cultured in vitro .

【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R775

【相似文献】