不同类型CRS的免疫病理学特性及其机制的初步探讨

发布时间：2018-02-26 23:24

  本文关键词： 慢性鼻-鼻窦炎 鼻息肉 嗜酸性粒细胞 Th1 Th2 Th17 Treg 慢性鼻-鼻窦炎 鼻息肉 嗜酸性粒细胞 中性粒细胞 Th1 Th2 Th17 不伴息肉性慢性鼻-鼻窦炎 病理学 肥大细胞 嗜酸性粒细胞　出处：《华中科技大学》2011年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究目的： 源于白种人的研究揭示合并鼻息肉性慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)和不合并鼻息肉性慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)鼻腔粘膜表现出不同的炎症形式。前者常表现为Th2反应占主导的嗜酸性粒细胞炎症反应,而后者则呈现Thl主导的炎症反应。对非白种人CRSwNP和CRSsNP患者进行系统研究更有利于了解慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis, CRS)的发病机制。因此本研究第一步目的就是了解武汉及周边地区CRSwNP及CRSsNP成人患者免疫病理学特点。 研究方法： 对50个正常下鼻甲组织、94个CRSsNP和151个CRSwNP手术样本石蜡切片进行HE染色并进行组织学特征观察(进行总炎症细胞,单个核细胞,嗜酸性粒细胞,浆细胞及粘液腺体计数)。根据对照组织嗜酸性粒细胞占总炎性细胞百分比的均数和标准差建立分界标准将CRSsNP和CRSwNP分为嗜酸性粒细胞性CRSsNP及CRSwNP和非嗜酸性粒细胞性CRSsNP及CRSwNP。另外通过对17个正常下鼻甲组织、36个CRSsNP和45个CRSwNP手术样本进行免疫组织化学染色分析探讨各种免疫细胞在对照、CRSsNP和CRSwNP中的浸润情况,包括总T细胞(CD3+),T辅助细胞(CD4+),细胞毒性T细胞(CD8+),B细胞(CD20+),巨噬细胞(CD68+),中性粒细胞(MPO+),树突状细胞(DC-LAMP+)。利用实时定量RT-PCR方法检测T辅助细胞亚型,包括Th1、Th2、Th17和Treg细胞核转录因子和相应细胞因子在对照、CRSsNP和CRSwNP中的表达情况。 结果： 大于50%CRSwNP患者表现为非嗜酸性粒细胞浸润性炎症反应。CRSwNP较CRSsNP有更多的嗜酸性粒细胞、浆细胞、CD3+、CD8+、CD20+和CD68+细胞浸润,但是MPO阳性表达率下降。尽管Th1/Th2/Th17核转录因子及细胞因子在CRSwNP和CRSsNP均上调,但是与对照相比二者FOXP3及TGF-β1 mRNA表达率下调。CRSsNP较CRSwNP含有更高水平的IFN-γ,然而仅有嗜酸性粒细胞性CRSwNP (eosinophilic CRSwNP, Eos-CRSwNP)较CRSsNP含有更高的Th2核转录因子GATA-3水平和细胞因子IL-5水平。除此之外,Eos-CRSwNP较non-Eos-CRSwNP含有更高的Th2炎症反应(Th2核转录因子GATA-3和细胞因子IL-5表达上调)和Th17炎症反应(Th17核转录因子RORC及Th17相关细胞因子IL-17A、IL-22及IL-23表达显著上调)。 结论： 国人CRSsNP和CRSwNP成人患者均表现出Treg功能受损和增强的Th1/Th2/Th17混合型炎症反应,但是CRSsNP表现出更为突出的Th1反应,以Th2为主导的嗜酸性粒细胞炎症反应和增高的Th17炎症反应仅存在于Eos-CRSwNP而不存在于non-Eos-CRSwNP。 研究目的： 在前面的研究中我们发现Th2极化和突出的嗜酸性粒细胞炎症以及增强的Th17反应仅存在于Eos-CRSwNP而并非non-Eos-CRSwNP,然而与Eos-CRSwNP相比中性粒细胞活化更多见于non-Eos-CRSwNP,这些数据提示我们Eos-CRSwNP与non-Eos-CRSwNP潜在的发病机制和过程可能存在差异,不同的T辅助细胞免疫反应可能是导致二者差异的原因。因此本研究目的就是(1)进一步验证嗜酸性粒细胞及中性粒细胞在Eos-CRSwNP与non-Eos-CRSwNP中的活化状态是否存在差异,并探讨炎症组织局部趋化嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润的化学因子；(2)进一步检测各T辅助细胞细胞因子蛋白表达水平及其相应趋化因子和趋化因子受体表达水平,验证前面实验结果及探讨导致炎症反应局部各免疫细胞浸润的直接原因；(3)比较两者在临床表现方面是否有差异；(4)探讨Eos-CRSwNP与non-Eos-CRSwNP形成不同免疫病理学特点的可能的影响因素。 研究方法： 根据我们前面建立的判定标准将CRSwNP分为Eos-CRSwNP与non-Eos-CRSwNP,比较两者临床表现。利用免疫组织化学方法探讨及比较Eos-CRSwNP、non-Eos-CRSwNP和对照组织中嗜酸性粒细胞(MBP+)和中性粒细胞(MPO+)的活化状态。利用实时定量RT-PCR方法或bio-plex蛋白检测技术检测嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin、RANTES以及GM-CSF和中性粒细胞趋化因子IL-8及GRO-α在不同组别中的表达及差异。Bio-plex蛋白检测技术检测Th1/Th2/Th17细胞因子IFN-γ/IL-4、IL-5、IL-13/以及IL-17, ELISA检测Th1、Th2趋化因子IP-10、TARC及MDC,实时定量RT-PCR分别检测Th1/Th2/Th17细胞趋化因子受体CXCR3、CCR4、CCR6, Th1趋化因子MIG、I-TAC。检测与探讨外周血总IgE、常见吸入性过敏原特异性IgE以及炎性组织匀浆总IgE和常见吸入性过敏原及葡萄球菌肠毒素A、B(staphylococcus enterotoxin A、B, SEA、SEB)特异性IgE与嗜酸性粒细胞炎症及T细胞免疫反应的相关性。 研究结果： 39例CRSwNP患者,其中Eos-CRSwNP 16例占41%, non-Eos-CRSwNP 23例占59%,二者临床表现方面未见明显差异。Eos-CRSwNP中活化嗜酸性粒细胞增多且与嗜酸性粒细胞炎症成正比,non-Eos-CRSwNP未见明显嗜酸性粒细胞活化现象。与对照及non-Eos-CRSwNP相比,Eos-CRSwNP嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin表达显著升高,而趋化因子RANTES及GM-CSF的表达三者间并无差异。non-Eos-CRSwNP较Eos-CRSwNP具有更常见的中性粒细胞浸润与活化,然而部分Eos-CRSwNP患者也表现出十分显著的中性粒细胞炎症。与对照相比中性粒细胞趋化因子IL-8在Eos-CRSwNP和non-Eos-CRSwNP均显著上调,然而细胞因子GRO-a在non-Eos-CRSwNP中的表达较对照和Eos-CRSwNP升高。与对照和non-Eos-CRSwNP相比,组织匀浆总IgE、Thl7特异性趋化受体、Th2细胞因子IL-5、IL-13以及Th2细胞特异性趋化因子受体CCR4和Th2细胞趋化因子TARC的表达在Eos-CRSwNP均显著上调。与对照相比,Eos-CRSwNP中Th1细胞因子IFN-γ,Th1细胞特异性趋化因子受体CXCR3表达显著升高,而non-Eos-CRSwNP却并无升高。30% Eos-CRSwNP检测出金黄色葡萄球菌A、B特异性IgE而non-Eos-CRSwNP及对照均未检测出。局部总IgE与局部嗜酸性粒细胞炎症及Th2细胞因子IL-13表达水平呈正相关。 研究结论： 本研究进一步证实Eos-CRSwNP与non-Eos-CRSwNP具有不同的免疫病理学特性：Th2极化和增强的Th17反应仅存在于Eos-CRSwNP而并不存在于non-Eos-CRSwNP,而non-Eos-CRSwNP具有更常见的中性粒细胞浸润与活化。局部IgE可能是导致不同CRSwNP表型的重要原因而葡萄球菌超抗原仅参与部分Eos-CRSwNP的发病。Eos-CRSwNP中Th2免疫细胞及嗜酸性粒细胞分别主要由TARC和eotaxin趋化,而GRO-α可能在non-Eos-CRSwNP中中性粒细胞趋化和活化中起重要作用。 目的：观察不伴息肉性慢性鼻-鼻窦炎(Chronic rhiosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)病理学特点,探讨肥大细胞及活化肥大细胞在CRSsNP中的作用及其与嗜酸性粒细胞炎症的关系。方法：1.采用HE染色对CRSsNP和对照下鼻甲组织学特点进行观察以及对组织总炎细胞,单个核细胞,浆细胞及嗜酸性粒细胞进行计数分析.利用甲苯胺兰和类胰蛋白酶免疫组化法分别检测肥大细胞和活化肥大细胞在CRSsNP和对照中的浸润情况,并探讨其与组织嗜酸性粒细胞炎症的相关性。结果：CRSsNP组织中总炎性细胞,单个核细胞以及浆细胞数均高于对照组,而嗜酸性粒细胞和粘膜固有层腺体数量于二者无明显差异.肥大细胞和活化肥大细胞计数呈相关性,但二者在CRSsNP和对照组中均未见明显差异,且二者与组织嗜酸性粒细胞炎症均无相关性。结论：CRSsNP较正常对照具有更重的炎症反应,但肥大细胞及其活化以及组织嗜酸性粒细胞二者无差异,且肥大细胞及其活化与嗜酸性粒细胞计数无相关性,提示肥大细胞及其介导的嗜酸性粒细胞炎症在CRSsNP的发病中并不起重要作用。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R765.21

【参考文献】

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1 何春燕,刘红刚,王宪忠;慢性鼻窦炎炎症细胞浸润情况观察[J];耳鼻咽喉头颈外科;2003年01期

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本文编号：1540145