TFH细胞及其相关细胞因子在变应性鼻炎小鼠模型中的表达和意义
本文选题：滤泡辅助T细胞 切入点：变应性鼻炎 出处：《华中科技大学》2013年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：第一部分变应性鼻炎小鼠动物模型的建立 目的：建立变应性鼻炎小鼠动物模型,探讨变应性鼻炎鼻腔粘膜随鼻内激发时间不同的组织学变化。 方法：4～6周龄BALB/c小鼠,用卵清蛋白50μg、氢氧化铝凝胶5mg加生理盐水1ml配成混悬液进行腹腔注射基础致敏共7次；5%卵清蛋白生理盐水滴鼻进行鼻腔激发,按组分别连续激发10天,20天,30天。对照组用生理盐水腹腔注射和滴鼻。观察小鼠行为学变化,酶联免疫吸附法测试外周血OVA-sIgE的水平,HE染色观察鼻粘膜嗜酸性粒细胞浸润情况,检测结果采用SPSS16.0统计软件进行数据处理,组间比较用T检验。 结果：造模结束后小鼠行为学评分分别为5.01±1.01、6.43+1.12、8.56+1.64,对照组0.85+0.23；鼻黏膜内EOS计数分别为45.91(45.91±5.80) pg/ml、48.81(48.81±3.49) pg/ml、51.38(51.38±3.19) pg/ml对照组0.69±0.12；血清OVA-sIgE浓度分别45.91(45.91±5.80)pg/ml.48.81(48.81±3.49)pg/ml51.38(51.38±3.19)pg/ml,对照组为41.71(41.71±2.58)pg/ml。T检验显示,实验组和对照组之间均存在显著性差异(P0.05),AR模型组之间差异有统计学意义(P0.05)。 结论：变应性鼻炎小鼠动物模型造模成功,随着鼻内激发时间的延长,OVA-sIgE浓度和症状有升高趋势。 第二部分TFH细胞在变应性鼻炎小鼠模型外周血中的流式细胞分析 目的：流式细胞术分析TFH细胞在变应性鼻炎小鼠模型外周血的变化和意义。 方法：变应性鼻炎小鼠模型成功建立后,用红细胞裂解液处理得到的外周血单个核细胞(PBMC)。CD4-Fitc和CXCR5-PE染色后用流式细胞仪分析检查外周血的CD4+CXCR5细胞的比例,ELISA分析血清总OVA-sIgE水平,用统计学软件SPSS16.0作T检验和Pearson相关性分析。 结果：卵清蛋白激发AR模型组外周血中TFH细胞占外周血单个核细胞的百分比分别为7.94±2.66%、8.65±3.49%、9.77±3.24%,对照组为4.97±0.20%,经比较差异有显著性,前者明显高于后者(T-test,P0.05)；AR模型组之间的百分比随着免疫激发时间延长的而增加,经比较差异有显著性(T-test, P0.05)。Pearson相关性分析显示TFH细胞的表达水平与总OVA-sIgE水平呈正相关(r=0.87,P=0.021)。 结论：TFH细胞在变应性鼻炎发病中有重要的作用,可能与IgE水平升高有关。 第三部分IL-21在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及与TFH之间的关系 目的：探讨IL-21分子在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及与OVA-sIgE、TFH细胞的关系。方法：变应性鼻炎BALB/c小鼠造模成功后,ELISA法测试外周血IL-21、OVA-sIgE的量,流式细胞术分析TFH细胞在外周血单个核细胞中的含量，SPSS16.0中Pearson相关性分析IL-21分子与各组数据之间的联系,均数间的比较用T检验。 结果：IL-21在对照组为186.25±11.68pg/ml, AR模型1组为181.13±4.93pg/ml,AR模型2组为168.46±11.04pg/ml, AR模型3组为164.54±10.52pg/ml。各试验组和对照组小鼠外周血IL-21的表达经比较差异有显著性意义(T-test,P0.05),试验组IL-21的表达水平要比正常组低,而且随着鼻内激发时间的延长,IL-21的表达水平逐渐下降；Pearson相关分析显示外周血IL-21的表达水平与CD4+CXCR5+T细胞比例呈负相关(r=-0.80,P=0.048),与血清总OVA-sIgE水平呈负相关关系(r=-0.86,P=0.031)。 结论：IL-21与TFH细胞及OVA-sIgE的含量呈负相关,临床上可能对变应性鼻炎有一定的治疗作用。 第四部分TFH相关因子在变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜中的表达 目的：探讨TFH相关因子CXCR5及Bcl-6在变应性鼻炎小鼠模型鼻粘膜中的表达及可能意义。 方法：小鼠变应性鼻炎模型造模成功后,用免疫组织化学方法分析CXCR5在小鼠鼻黏膜中的表达情况。并用Westernblot和PCR的方法对TFH关键转录因子Bcl-6进行分析,数据用医学统计学软件SPSS16.0处理及比较。 结果：Western blot测试显示TFH关键转录因子的表达在实验组鼻黏膜明显升高,其相对密度值分别为0.67、0.84、0.98,而对照组鼻黏膜为0.53。鼻黏膜适时荧光定量PCR检测显示Bcl-6mRNA的表达也明显增高,其扩增倍数分别为1.63、1.77、1.85、1.92,而对照组鼻黏膜为0.90(T-test, P0.05)。鼻黏膜CXCR5免疫组织化学分析的结果显示实验组鼻黏膜CXCR5+细胞数比对照组鼻黏膜中CXCR5+细胞数明显增多(T-test, P0.05),广泛分布在粘膜及粘膜下层中。且随着鼻内激发时间的延长表达增多。 结论：变应性鼻炎小鼠鼻粘膜中CXCR5及Bcl-6表达明显增强,可能参与了变应性鼻炎的发病过程。
[Abstract]:The first part of the animal model of allergic rhinitis in mice
Objective: to establish an animal model of allergic rhinitis in mice and to explore the histological changes of nasal mucosa with different excitation time in the nasal cavity.
Methods: 4~6 week old BALB/c mice were 50 g, Aluminium Hydroxide Gel 5mg plus saline 1ml with mixed intraperitoneal injection of a total of 7 times of sensitized suspension; 5% ova saline nasal nasal stimulation, were excited for 10 days, 20 days, 30 days. The control group with normal saline intraperitoneal injection and intranasal. Observed behavioral changes in mice, serum OVA-sIgE ELISA test level, observe the nasal mucosa infiltration of eosinophils in HE staining, the detection results using SPSS16.0 statistical software for data processing, group compared with the T test.
Results: after the modeling of mouse behavior scores were 5.01 + 1.01,6.43+1.12,8.56+1.64, the control group 0.85+0.23; nasal mucosa EOS counts were 45.91 (45.91 + 5.80) pg/ml, 48.81 (48.81 + 3.49) pg/ml, 51.38 (51.38 + 3.19) pg/ml control group 0.69 + 0.12; serum OVA-sIgE concentrations were 45.91 (45.91 + 5.80) pg/ml.48.81 (48.81 + 3.49) pg/ml51.38 (51.38 + 3.19) pg/ml, the control group was 41.71 (41.71 + 2.58) pg/ml.T test showed that there were significant differences between the experimental group and the control group (P0.05), there were statistically significant differences between the AR model group (P0.05).
Conclusion: the animal model of allergic rhinitis in mice is successful. With the prolongation of the time of nasal stimulation, the concentration and symptoms of OVA-sIgE are increasing.
Flow cytometric analysis of the second part of TFH cells in the peripheral blood of Allergic Rhinitis Mice
Objective: to analyze the changes and significance of TFH cells in the peripheral blood of allergic rhinitis mice model by flow cytometry.
Methods: we successfully established the mouse model of allergic rhinitis, with red blood cell lysate from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and.CD4-Fitc CXCR5-PE staining by flow cytometry analysis of peripheral blood CD4+CXCR5 cell ratio, ELISA analysis of the total serum OVA-sIgE level, T test and Pearson correlation analysis the SPSS16.0 statistical software.
Results: the ova AR model group of peripheral blood TFH cell percentage of peripheral blood mononuclear cells were 7.94 + 2.66%, 8.65 + 3.49%, 9.77 + 3.24%, 0.20% + 4.97 in the control group, the difference was significant, the former is higher than the latter (T-test, P0.05); the percentage between AR model the group increased with the prolonged immune challenge, by comparison with significant difference (T-test, P0.05).Pearson correlation analysis showed positive expression of TFH cells and total OVA-sIgE level (r=0.87, P=0.021).
Conclusion: TFH cells play an important role in the pathogenesis of allergic rhinitis, and may be related to the increase of IgE level.
The expression of the third part of IL-21 in the mice model of allergic rhinitis and the relationship with TFH
Objective: To investigate the IL-21 molecule in the mouse model of allergic rhinitis and the expression of OVA-sIgE and TFH, the relationship between cells. Methods: BALB/c mice allergic rhinitis after successful modeling, peripheral blood IL-21 ELISA test, OVA-sIgE, analysis of the content of TFH cells in peripheral blood mononuclear cells by flow cytometry and between the IL-21 molecules and the set of data link Pearson correlation analysis between SPSS16.0, were compared with T test.
Results: IL-21 in control group was 186.25 + 11.68pg/ml, 1 AR model group was 181.13 + 4.93pg/ml, 2 AR model group was 168.46 + 11.04pg/ml. The expression of AR in model group is 164.54 + 3 10.52pg/ml. of the test group and the control group of mice peripheral blood IL-21 the difference was significant (T-test, P0.05) expression. The level of IL-21 of the experimental group than the normal group, and with the extension of intranasal irradiation time, the expression level of IL-21 decreased gradually; the Pearson correlation analysis showed that the expression level of IL-21 in peripheral blood was negatively correlated with the percentage of CD4+CXCR5+T cells (r=-0.80, P=0.048), and negatively related to the total serum OVA-sIgE levels (r=-0.86, P=0.031).
Conclusion: IL-21 has a negative correlation with the content of TFH cells and OVA-sIgE, and may have a certain therapeutic effect on allergic rhinitis in clinical.
The expression of TFH related factors in the nasal mucosa of Allergic Rhinitis Mice Model in fourth parts
Objective: To investigate the expression and significance of TFH related factors CXCR5 and Bcl-6 in the nasal mucosa of allergic rhinitis mice.
Methods: the mouse model of allergic rhinitis after the success of modeling, analysis and expression of CXCR5 in mouse nasal mucosa by immunohistochemical method. And the TFH key transcription factor Bcl-6 was analyzed with the method of Westernblot and PCR, using medical statistics software SPSS16.0 and compared with the data.
Results: Western blot test showed that the expression of the key transcription factor TFH increased significantly in the experimental group nasal mucosa, the relative density values were 0.67,0.84,0.98, while the control group was 0.53. in nasal mucosa of nasal mucosa of real-time fluorescent quantitative PCR detection showed that the expression of Bcl-6mRNA was also increased, the amplification ratio was 1.63,1.77,1.85,1.92, while the control group was 0.90 in nasal mucosa (T-test, P0.05). Analysis of the nasal mucosa CXCR5 immunohistochemistry results showed that CXCR5+ cells in nasal mucosa of experimental group significantly increased the number of CXCR5+ cells than the control group in nasal mucosa (T-test, P0.05), the number of widely distributed in the mucosa and submucosa. And with nasal challenge time was increased.
Conclusion: the expression of CXCR5 and Bcl-6 in nasal mucosa of allergic rhinitis mice is obviously enhanced, which may be involved in the pathogenesis of allergic rhinitis.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R765.21
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