不同剂量柚皮素介导的促氧化作用及其对CNE2细胞生长的调控

发布时间：2018-03-04 22:26

本文选题：柚皮素　切入点：CNE　出处：《医学研究生学报》2014年04期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的柚皮素重要的生理活性使其具有广泛的开发应用前景。文中探讨不同剂量柚皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制。方法 MTT法检测不同剂量柚皮素(0、0.005、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL)作用CNE2细胞不同时间(24、48、72 h)对其细胞生长率的影响;流式细胞仪检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对其细胞周期的影响;采用Hochest 33258荧光染色观察不同剂量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡形态的变化;采用Annexin V-FITC流式细胞术检测不同剂量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡率的影响;采用2,7-二氯乙酰乙酸(2,7-dichloro fluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48h对其细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的变化;采用实时荧光定量PCR法(real-tmie fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测不同剂量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2细胞48 h对C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平的变化。结果与对照组相比,0.02、0.04 mg/mL柚皮素能引发CNE2细胞内ROS含量低水平升高,ROS的MFI分别为5186±183.50、5508±155.37,差异有统计学意义(P0.05),由此诱导细胞增殖调控基因C-fos表达,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),加速细胞周期运转,促进CNE2细胞分裂增殖;而0.2、0.4 mg/mL柚皮素则能引发ROS大量产生,ROS的MFI分别为10 758±179.82、11 241±114.45,差异有统计学意义(P0.01),由此诱导促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表达,促进CNE2细胞凋亡,差异有统计学意义(P0.01),有效抑制CNE2细胞增殖。结论在0.005~0.8 mg/mL剂量范围,柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用,相对较低剂量体现为一定的促癌活性,相对较高剂量则体现为强烈的抑癌活性。
[Abstract]:Objective to study the effects of naringin on the growth of human nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE2 cells and its related mechanism due to its important physiological activity. Methods different doses of naringin were detected by MTT assay. The effect of naringin 0. 005, 0. 01C, 0. 02, 0. 04, 0. 4 (0. 8 mg / mL) on the cell growth rate of CNE2 cells at different time points (0. 041) and 0. 046 ~ 0. 010 (mg 路mL)) at different time points (P < 0. 05). The effect of naringin on the growth rate of CNE2 cells was studied. Flow cytometry was used to detect the effect of different doses of naringin 0. 02% 0. 04 mg / mL) on the cell cycle of CNE2 cells for 48 h, and Hochest 33258 fluorescence staining was used to observe the changes of apoptosis morphology of CNE2 cells treated with different doses of naringin 0. 22 mg / mL for 48 h. Annexin V-FITC flow cytometry was used to detect the effect of different doses of naringin (0.2 mg / mL) on the apoptosis of CNE2 cells for 48 h. The changes of reactive oxygen speciesrose in CNE2 cells treated with different doses of naringin 0. 02 ~ 0. 04 and 0. 2 mg / mL for 48 h were detected by using the fluorescence probe of 2 ~ 7 dichloro fluorescein diacetate (DCFH-DAA). The changes of mRNA expression of C-fossil-Bax and Bcl-2 gene in CNE2 cells treated with different doses of naringin 0.02 0.04 0.2g / mL for 48 h were detected by real-time fluorescence quantitative PCR qPCR.Results compared with the control group, naringin of 0.020.04 mg/mL could induce ROS content in CNE2 cells. The MFI of Ros increased at low level was 5186 卤183.50 / 5508 卤155.37, respectively, and the difference was statistically significant (P 0.05), which induced the expression of C-fos gene. The difference was statistically significant (P0.05 or P0.01), which accelerated the cell cycle and promoted the division and proliferation of CNE2 cells. On the other hand, the MFI of 0.2n 0.4 mg/mL naringin could induce a large amount of ROS to produce Ros, which was 10 758 卤179.82 卤11 241 卤114.45, respectively. The difference was statistically significant (P 0.01), which could induce the apoptosis gene Bax and inhibit the expression of anti-apoptosis gene Bcl-2, and promote the apoptosis of CNE2 cells. Conclusion in the range of 0.0050.80 mg/mL, naringin has a bidirectional effect on the growth of CNE2 cells, and a relatively low dose of naringin can promote the proliferation of CNE2 cells. The relatively high dose showed strong tumor suppressor activity.
【作者单位】：桂林医学院生物技术学院;
【基金】：广西壮族自治区自然科学基金(2010GXNSFA 013254) 广西壮族自治区医学科学实验中心开放基金(KFJJ2010-57) 广西壮族自治区教育厅科研基金(201010LX328)
【分类号】：R739.63;Q253

【参考文献】

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【共引文献】

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