姜黄素对鼻咽癌细胞系CNE-1RECK基因表达及甲基化的影响

发布时间：2018-04-17 04:24

  本文选题：鼻咽癌 + 伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)　； 参考：《基础医学与临床》2014年06期

【摘要】：目的探讨姜黄素对鼻咽癌细胞RECK基因表达及甲基化的影响,并探讨可能的机制。方法体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1,用1、10和30μmol/L姜黄素处理后,用Western blot和实时定量PCR分别检测RECK基因以及DNA甲基化酶1(DNMT1)的蛋白和mRNA表达;高效液相色谱-电喷雾质谱检测RECK甲基化,同时用MTT检测CNE-1细胞增殖,EMSA法检测核转录因子Sp1的DNA结合活性。结果 CNE-1细胞未刺激时RECK表达水平较低,而经1~30μmol/L姜黄素处理后,能显著增强RECK蛋白和mRNA的表达(P0.05)。30μmol/L姜黄素处理CNE-1细胞后,RECK启动子甲基化水平降低至31%(P0.05),全基因组甲基化水平降低39%(P0.05),细胞系的甲基化活性减少了72%(P0.05)。同时,姜黄素能显著降低CNE-1细胞中DNMT1的蛋白和mRNA表达(P0.05),也能减低CNE-1细胞的存活率(P0.05)。EMSA结果显示,姜黄素处理后,CNE-1细胞中Sp1的DNA活性显著降低。结论姜黄素可能通过上调RECK基因表达,降低细胞内甲基化水平,从而抑制CNE-1细胞生长。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of curcumin on RECK gene expression and methylation in nasopharyngeal carcinoma cells.Methods Nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-1 was cultured in vitro. Western blot and real-time quantitative PCR were used to detect the protein and mRNA expression of RECK gene and DNA methylase 1 DNMT1, and RECK methylation was detected by high performance liquid chromatography-electrospray mass spectrometry (HPLC-ESI-MS).At the same time, MTT was used to detect the DNA binding activity of nuclear transcription factor Sp1 by CNE-1 cell proliferation and EMSA assay.Results the level of RECK expression in CNE-1 cells was lower than that in unstimulated cells, but was treated with curcumin for 30 渭 mol/L.After treated with curcumin of RECK protein and mRNA, the methylation level of Reck promoter in CNE-1 cells was reduced to 31 ~ 1 ~ 0. 05%, the whole genome methylation level was reduced to 39 ~ (0.05) and the methylation activity of cell line was decreased by 72 ~ 0. 05%.At the same time, curcumin significantly decreased the expression of DNMT1 protein and mRNA in CNE-1 cells, and also decreased the survival rate of CNE-1 cells. EMSA results showed that the DNA activity of Sp1 in CNE-1 cells was significantly decreased after curcumin treatment.Conclusion curcumin may inhibit the growth of CNE-1 cells by up-regulating the expression of RECK gene and decreasing the intracellular methylation level.
【作者单位】： 南华大学附属第二医院肿瘤内科;南华大学医学院肿瘤研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81372894)
【分类号】：R739.63

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1762060