蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin抑制鼻咽癌细胞机制的研究

发布时间：2018-04-30 14:06

  本文选题：精氨酸酯酶 + 鼻咽癌细胞系　； 参考：《广西医科大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的：研究蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对鼻咽癌细胞系(CNE-2)的多药耐药相关蛋白1(MRP1),环氧合酶-2(COX-2)和表皮钙粘素(E-CD)表达的影响,探讨Agkihpin抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的机制。方法：体外培养鼻咽癌细胞系CNE-2,用不同浓度的蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin处理鼻咽癌细胞系72 h后,收集细胞,采用RT-PCR法、免疫细胞化学和蛋白印迹(Western blotting)检测MRP1、COX-2和E-CD的mRNA和蛋白表达水平在CNE-2细胞中的变化,分析Agkihpin抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的机制。结果：1.不同浓度Agkihpin作用CNE-2细胞72 h后MRP1 mRNA和蛋白表达均降低,并呈现出一定的浓度依赖效应,Agkihpin浓度越高,MRP1表达下调越显著。RT-PCR结果显示,Agkihpin加药组中,4.13、0.516和0.207 μg/ml浓度作用的CNE-2细胞中MRP1 mRNA与对照组比较均有明显下调(P0.01)。Agkihpin加药组中,4.13、0.516和0.207 μg/ml浓度作用的CNE-2细胞中MRP1蛋白表达量均有下调(P0.01)：免疫细胞化学显示,MRP1蛋白表达分别下降了60.53%、45.21%和26.95%；Western blotting检测MRP1蛋白表达结果与免疫细胞化学检测结果类似,均呈下降趋势。2.不同浓度Agkihpin作用CNE-2细胞72 h后COX-2 mRNA口蛋白表达均降低,并呈现出一定的浓度依赖效应,Agkihpin浓度越高,COX-2表达下调越显著。RT-PCR结果显示,各加药组的CNE-2细胞中COX-2 mRNA与对照组比较均有明显下调(P0.01)。不同浓度Agkihpin作用的CNE-2细胞中COX-2蛋白表达量均有下调(P0.01)：免疫细胞化学显示,COX-2蛋白表达分别下降了52.17%、32.82%和26.74%；Western blotting检测COX-2蛋白表达结果与免疫细胞化学检测结果类似,均呈下降趋势。3.不同浓度Agkihpin作用CNE-2细胞72 h后E-CD mRNA和蛋白表达均降低,并呈现出一定的浓度依赖效应,Agkihpin浓度越高,E-CD表达下调越显著。RT-PCR结果显示,Agkihpin加药组中,4.13、0.516和0.207 μg/ml浓度作用的CNE-2细胞中E-CD mRNA与对照组比较均有明显下调(P0.05)。Agkihpin各加药组中CNE-2细胞中E-CD蛋白表达量均有下调(P0.01)：免疫细胞化学显示,E-CD蛋白表达分别下降了36.66%、31.28%和14.21%。Western blotting检测E-CD蛋白表达结果与免疫细胞化学检测结果类似,均呈下降趋势。结论：1.在鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制MRP1的表达,并且随浓度的增大有明显的抑制作用,这可能是Agkihpin能降低鼻咽癌细胞活力的原因之一；Agkihpin抑制MRP1的表达提示,在一定程度上Agkihpin可通过抑制MRP1表达来减少细胞内药物的排出而提高肿瘤细胞对药物的敏感性。2.在鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制COX-2的表达,并且随浓度的增大有明显的抑制作用；Agkihpin对COX-2的抑制作用,可能成为鼻咽癌化疗的有效药物。3.在鼻咽癌CNE-2细胞系中,Agkihpin能抑制E-CD的表达,并且随浓度的增大有明显的抑制作用。4. Agkihpin可能通过下调MRP1来抑制鼻咽癌细胞系CNE-2的活力,而通过下调COX-2和E-CD来抑制CNE-2的迁移和增殖。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of arginine esterase (Agkihpin) from snake venom on the expression of multidrug resistance-associated protein (MRP1), cyclooxygenase-2 (COX-2) and epidermal cadherin (E-CDE) in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line CNE-2, and to explore the mechanism of inhibition of Agkihpin on human nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2 cells. Methods: nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2 was cultured in vitro. The nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2 was treated with different concentrations of arginine esterase Agkihpin for 72 h. The cells were collected by RT-PCR assay. The changes of mRNA and protein expression of COX-2 and E-CD in CNE-2 cells were detected by immunocytochemistry and Western blotting. The mechanism of Agkihpin inhibition on CNE-2 cells of human nasopharyngeal carcinoma was analyzed. The result is 1: 1. The expression of MRP1 mRNA and protein decreased in CNE-2 cells treated with different concentrations of Agkihpin for 72 h. The lower the concentration of Agkihpin, the more down-regulated the expression of MRP1. RT-PCR results showed that the MRP1 mRNA in the CNE-2 cells treated with 4. 13 渭 g/ml and 0.207 渭 g/ml was significantly down-regulated than that in the control group. 4. 130.516 and 4. 130.516 in the agkihpin group and 0.207 渭 g/ml in the control group, respectively. The expression of MRP1 protein was down-regulated in CNE-2 cells treated with 0.207 渭 g/ml. The results of immunocytochemistry showed that the expression of MRP1 P1 protein decreased by 60.5345.21% and 26.95% respectively, and the results were similar to those detected by immunocytochemistry. All showed a downward trend. The expression of COX-2 mRNA protein in CNE-2 cells decreased after 72 h treatment with different concentrations of Agkihpin. The higher the concentration of Agkihpin was, the lower the expression of COX-2 was. Compared with the control group, COX-2 mRNA in CNE-2 cells of each drug group was significantly down-regulated. The expression of COX-2 protein was down-regulated in CNE-2 cells treated with different concentrations of Agkihpin. The results of immunocytochemistry showed that the expression of COX-2 protein decreased by 52.1732.82% and 26.74%, respectively, and the expression of COX-2 protein was similar to that of immunocytochemistry. The expression of E-CD mRNA and protein decreased in CNE-2 cells treated with different concentrations of Agkihpin for 72 h. The lower the concentration of Agkihpin was, the more down-regulated the E-CD expression was. RT-PCR results showed that the E-CD mRNA in CNE-2 cells treated with 4. 13 渭 g/ml and 0.207 渭 g/ml was significantly down-regulated compared with the control group. The expression of E-CD protein decreased by 36.66% and 31.28%, respectively, and the expression of E-CD protein by 14.21%.Western blotting was similar to that by immunocytochemistry. All showed a downward trend. Conclusion 1. Agkihpin can inhibit the expression of MRP1 in nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2 cell line, and has obvious inhibitory effect with the increase of concentration. This may be one of the reasons why Agkihpin can reduce the viability of NPC cell line. It is suggested that Agkihpin inhibits the expression of MRP1. To a certain extent, Agkihpin can increase the sensitivity of tumor cells to drugs by inhibiting the expression of MRP1 to reduce the excretion of drugs in the cells. Agkihpin can inhibit the expression of COX-2 in nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2 cell line, and has obvious inhibitory effect on COX-2 with the increase of concentration. It may be an effective drug for nasopharyngeal carcinoma chemotherapy. Agkihpin can inhibit the expression of E-CD in nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE-2 cell line. Agkihpin may inhibit the activity of CNE-2 by down-regulation of MRP1, and inhibit the migration and proliferation of CNE-2 by down-regulating COX-2 and E-CD.
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R739.63

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本文编号：1824853