诱导性多能干细胞正常小鼠耳蜗内移植的实验研究

发布时间：2018-06-20 03:59

  本文选题：诱导性多能干细胞 + 内耳移植　； 参考：《南昌大学》2014年硕士论文

【摘要】：研究目的： 利用显微注射的方法将诱导性多能干细胞（iPSCs）移植至正常小鼠耳蜗内，观察其分化转归情况，为iPSCs的耳聋治疗提供一定的理论依据和试验基础。 研究方法： 1.建立稳定的小鼠iPSCs的培养体系，对稳定传代的小鼠iPSCs进行体外鉴定。 2.小鼠iPSCs细胞的标记和移植：用CM-Dil染料标记iPSCs，流式细胞仪鉴定标记效率。20只正常6-8周龄SPF级CD-1/ICR鼠随机平均分为A、B两组：A组为试验组，B组为对照组，将左耳定为试验耳，，实验组移植CM-Dil标记的iPSCs，对照组移植等体积的DMEM基础培养基。两组均在术前1周和术后1月对小鼠左耳行听性脑干反应（ABR）的检测。 3.miPSCs耳蜗移植后分化细胞的鉴定：细胞移植1月后免疫组织荧光染色鉴定移植后的细胞是否表达毛细胞标志物（Myosin Ⅶa、Espin）和神经元细胞标志物（Nestin、Neurofilament-M）。 4.miPSCs耳蜗内移植后用HE染色鉴定是否有畸胎瘤形成。 结果： 1.成功建立了稳定的小鼠iPSCs培养体系。稳定传代的小鼠iPSCs经AP染色鉴定阳性且可形成EBs。 2.荧光染料（CM-Dil）对小鼠iPS细胞的标记效率达到96.42%。术前1周，A组、B组ABR反应阈分别为24.50±5.50dB SPL、26.00±6.15dB SPL；A、B两组术前1周的ABR反应阈比较差异无统计学意义(p=0.572＞0.05)。术后1月，A组、B组ABR反应阈分别为70.50±4.97dB SPL、68.00±5.37dB SPL；A、B两组术后1月的ABR反应阈比较差异无统计学意义(p=0.295＞0.05)。A、B两组ABR反应阈术后均较术前高（p值均＜0.05)，差异有统计学意义。 3.A组小鼠耳蜗的内外淋巴内及蜗轴内均可见CM-Dil标记的小鼠iPSCs，并且部分红色荧光标记的细胞表达毛细胞标志物（Myosin Ⅶa、Espin）和神经元细胞标志物（Nestin、Neurofilament-M）。B组耳蜗内未见有红色荧光表达。 4.HE染色鉴定移植miPSCs后耳蜗内可见畸胎瘤形成。 结论： 1.耳蜗内移植后的小鼠iPSCs可以分化为表达毛细胞标志物的细胞； 2.耳蜗内移植后的小鼠iPSCs可以分化为表达神经元标志物的细胞； 2.小鼠iPSCs耳蜗内移植后有形成畸胎瘤的可能； 4.经圆窗径路耳蜗移植iPSCs短期内不能改善因为损伤导致的小鼠听力下降。
[Abstract]:Objective: to observe the differentiation and prognosis of induced pluripotent stem cells (iPSCs) in normal mouse cochlea by microinjection, and to provide a theoretical basis and experimental basis for the treatment of iPSCs for deafness. Methods: 1. To establish a stable culture system of mouse iPSCs, and to identify the stable passage of mouse iPSCs in vitro. 2. Labeling and transplantation of mouse iPSCs cells: iPSCswere labeled with CM-Dil dye, and 20 normal SPF CD-1 / ICR mice of 6-8 weeks old were randomly divided into two groups: group A: group A as control group, group B as control group, and group B as experimental ear. CM-Dil labeled iPSCswere transplanted in experimental group and DMEM basic medium was transplanted in control group. The auditory brainstem response (ABR) in the left ear of mice was detected 1 week before operation and 1 month after operation. 3. Identification of differentiated cells after cochlear transplantation of miPSCs: immunofluorescence staining after one month of cell transplantation to identify the fine cells after transplantation Whether the hair cell marker (Myosin 鈪

本文编号：2042852