喉癌来源黑色素瘤抗原A3在小鼠黑色素瘤细胞模型的表达

发布时间：2018-06-23 22:34

  本文选题：黑色素瘤抗原A + 真核载体　； 参考：《中国免疫学杂志》2014年11期

【摘要】：目的:建立pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒在小鼠黑色素瘤B16细胞稳定表达的肿瘤细胞模型。方法:将喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(Melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)构建成真核质粒pIRES2-EGFP/MAGE-A3,脂质体法将pIRES2-EGFP/MAGE-A3转染小鼠黑色素瘤B16细胞,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达,荧光定量PCR(qRT-PCR)检查MAGE-A3在B16细胞中的转录。结果:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,qRT-PCR可检测到MAGE-A3 mRNA的转录。结论:pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核质粒通过脂质体法能有效转染,并在B16稳定表达,成功建立了MAGE-A3肿瘤细胞模型。
[Abstract]:Aim: to establish a tumor cell model with stable expression of pIRES2-EGFP / MAGE-A3 eukaryotic plasmid in murine melanoma B16 cells. Methods: Melanoma-associated antigen A3 (MAGE-A3) was constructed into eukaryotic plasmid pIRES2-EGFPP-MAGE-A3. PIRES2-EGFP / MAGE-A3 was transfected into mouse melanoma B16 cells by liposome method. The expression of enhanced green fluorescent protein (EGFP) in positive clones was detected by fluorescence microscopy, and the transcription of MAGE-A3 in B16 cells was detected by fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR). Results the positive clones were obtained after transfection of the eukaryotic plasmid: pIRES2-EGFP / MAGE-A3 into B16 cells. It was found that the expression of fusion protein produced bright green fluorescence qRT-PCR and the transcription of MAGE-A3 mRNA could be detected by RT-PCR. Conclusion the Eukaryotic plasmid of 1: pIRES2-EGFP / MAGE-A3 can be transfected effectively by liposome method and expressed stably in B16. The MAGE-A3 tumor cell model was successfully established.
【作者单位】： 广州市第一人民医院耳鼻咽喉科;广州医科大学实验医学研究中心;
【基金】：广州市科技和信息化局社会发展应用基础研究专项(No.2013J4100024) 广东省科技厅产业技术研究与开发资金计划项目(No.2012B031800340)资助
【分类号】：R739.65

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2058698