CaV1.3钙离子通道蛋白在内耳的表达和年龄相关性听力损失的研究

发布时间：2018-08-27 06:10

【摘要】：目的 研究不同周龄C57BL/6小鼠内耳形态的变化以及CaV1.3钙离子通道蛋白在内耳组织中的表达,探讨其在年龄相关性听力损失(age-related hearing loss, AHL)中的作用。 方法 应用听性脑干反应(ABR)分别检测4周龄,14周龄,24周龄,48周龄的C57BL/6小鼠的听力,HE染色和扫描电镜观察内耳形态年龄相关性的变化。用免疫荧光方法观察CaV1.3钙离子通道蛋白在内耳组织中的分布和表达。应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)技术检测CaV1.3钙通道蛋白基因(CACNA1D)mRNA在内耳组织的表达。 结果 随着年龄的增长ABR反应阈值明显提高,相对与其他周龄而言,48周龄的C57BL/6小鼠ABR反应阈值则显著增高。随着年龄的增长毛细胞和螺旋神经节细胞也逐渐出现缺失,静纤毛数量有所减少,少数出现倒伏等病理变化;48周左右毛细胞几乎完全缺失,螺旋神经节细胞缺失明显增多,血管纹和螺旋韧带可见一定程度的萎缩。免疫荧光显示CaV1.3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞的侧膜和顶膜、血管纹细胞,螺旋(板)缘细胞、螺旋韧带、螺旋凸,前庭膜上也有适度的表达,CaV1.3在老龄鼠(48周龄)耳蜗各部分的表达明显减少。RT-PCR的结果显示CaV1.3钙通道蛋白基因(CACNA1D)mRNA表达具有一定的组织特异性,在耳蜗和肾脏中均有表达,随年龄的增长CaV1.3钙通道蛋白表达量逐渐减少。 结论 揭示了C57BL/6小鼠内耳形态以及听觉功能的年龄相关性改变,CaV1.3钙离子通道蛋白随年龄的增长而减少,可能与年龄相关性听力损失有一定的关系。
[Abstract]:Objective to study the morphological changes of the inner ear and the expression of CaV1.3 calcium channel protein in the inner ear of C57BL/6 mice at different weeks, and to explore its role in age-related hearing loss (age-related hearing loss, AHL). Methods auditory brainstem response (ABR) was used to detect the morphological and age-related changes of the inner ear in C57BL/6 mice at the age of 4 weeks, 14 weeks and 24 weeks and 48 weeks of age, respectively. The distribution and expression of CaV1.3 calcium channel protein in inner ear were observed by immunofluorescence. The expression of CaV1.3 calcium channel protein (CACNA1D) mRNA in inner ear was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR). Results with the increase of age, the threshold of ABR reaction increased significantly, and the threshold of ABR reaction in C57BL/6 mice at 48 weeks of age was significantly higher than that in other weeks. Along with the age, hair cells and spiral ganglion cells also appeared to be missing gradually, the number of static cilia decreased, a few pathological changes such as lodging almost completely disappeared around 48 weeks, and the loss of spiral ganglion cells increased obviously. The stria vascularis and the spiral ligament were atrophied to a certain extent. Immunofluorescence showed that CaV1.3 was mainly distributed in the lateral membrane and apical membrane of mouse cochlear inner and outer hair cells, stria vascularis cells, spiral (plate) marginal cells, helical ligaments, spiral convexes. There was also a moderate expression of CaV1.3 on the vestibular membrane. The results of RT-PCR showed that the expression of CaV1.3 calcium channel protein (CACNA1D) mRNA in the cochlea was tissue specific and expressed in the cochlea and kidney. The expression of CaV1.3 calcium channel protein decreased with age. Conclusion Age-related changes of inner ear morphology and auditory function in C57BL/6 mice may be related to age-related hearing loss.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R764

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本文编号：2206366