纳米酞菁光敏剂光动力治疗脉络膜新生血管的实验研究

发布时间：2018-10-14 08:36

【摘要】：目的:(1)引入纳米载体,制备第三代光敏剂——纳米酞菁光敏剂。(2)体外培养人RPE细胞和HREC,并制作CNV大鼠模型,研究纳米酞菁光敏剂在体内外的药代动力学以及药效学,评估纳米载体的构效关系。方法:(1)合成芳醚树枝状酞菁锌G_1-ZnPc(COOH)_8和G_2-ZnPc(COOH)_(16),以及两亲性嵌段共聚物PLL-PEG-PLL,以后者为载体制备两种纳米粒子——纳米酞菁光敏剂G_1-ZnPc(COOH)_8/m和G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m,通过AFM、TEM、UV/vis和荧光光谱对纳米粒子的形态和结构进行表征。(2)紫外可见分光光度计法研究G_1-ZnPc(COOH)_8、G_1-ZnPc(COOH)_8/m在体外培养人RPE和HREC的药代动力学;CCK-8检测试剂盒研究两种光敏剂介导的PDT对人RPE细胞的毒性作用;利用LSCM观察了PDT前后细胞△Ψm的变化。(3)通过三面镜和激光间接检眼镜两种方式将倍频532nm激光导入BN大鼠眼内,间接检眼镜检查、FFA、OCT和光电镜检查证实并比较两种导入方式制作CNV模型的可行性。(4)通过OCT、FFA和电镜检查比较G_1-ZnPc(COOH)_8和G_1-ZnPc(COOH)_8/m两种光敏剂介导的PDT对CNV的影响。结果:(1)两种纳米粒子均有特殊的“核-壳结构”,G_1-ZnPc(COOH)_8/m呈球形,直径大约为50nm,G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m呈扁球形,直径大约为120nm,两者的分散性均比较好;G_1-ZnPc(COOH)_8/m最大吸收峰为638nm,相对于G_1-ZnPc(COOH)_8红移了11nm,G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m的最大吸收峰为623nm,相对于G_2-ZnPc(COOH)16红移了13nm;G_1-ZnPc(COOH)_8和G_2-ZnPc(COOH) _(16)荧光寿命分别为5.37ns和0.49ns,而G_1-ZnPc(COOH)_8/m和G_2-ZnPc(COOH)_(16) /m为5.93ns和0.9ns。(2)分析RPE细胞和HREC对两种光敏剂的摄取量,发现两类细胞间差异有显著性,P0.01,两种药物间差异没有显著性,P0.05;两种光敏剂介导的PDT对RPE细胞均有明显的杀伤作用,纳米光敏剂组细胞存活率明显比自由酞菁配合物组低,差异有显著性(p0.01);PDT后LSCM下两个实验组细胞呈较强的单一绿色荧光。(3)光凝后3w,OCT检查显示大鼠视网膜神经上皮下有团块状、梭形或不规则膨大,其间可见CNV膜的条带状或片状红白色高密度反光,FFA检查发现大部分光凝斑可见明显荧光渗漏,组织切片光学显微镜下可见有毛细血管样物质突向视网膜下,电镜下见增殖组织中新生的血管内皮细胞围成管腔,其中见红细胞;比较两组模型CNV的渗漏发生率,发现两种不同激光导入法差异没有显著性,P0.05。(4)PDT处理后1w和2w,PDT1与PDT2组两组之间渗漏好转率差异没有显著性(P0.05);处理后1w,PDT1与PDT2组两组之间CNV闭合率差异没有显著性(P0.05),而处理后2w,PDT2的CNV闭合率明显高于PDT1组,两组之间差异有显著性(P0.05);PDT后两个实验组大鼠视网膜CNV的好转和闭合得到眼底检查、OCT、FFA和电镜检查的证实;PDT后1w和2w,4个对照组CNV渗漏情况和造模3周时相比未见明显变化。结论:(1)芳醚树枝状酞菁锌引入纳米载体后荧光强度减弱,荧光寿命增长。(2)纳米酞菁光敏剂介导的PDT对RPE细胞杀伤作用高于自由酞菁配合物。(3)激光间接检眼镜导入法导入倍频532nm激光可以成功诱导CNV模型,值得在CNV模型制作中推广。(4)纳米酞菁光敏剂介导的PDT相对于自由酞菁配合物有更高的CNV闭合率,对于CNV,改良的纳米酞菁光敏剂具有更高的光动力活性。
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【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R773.4

【参考文献】