脂多糖预处理对角膜细胞固有免疫的调控

发布时间：2019-03-22 09:26

【摘要】： [研究背景]真菌性角膜炎是严重的致盲性眼病,如不能及时的诊断和治疗将导致角膜穿孔、失明甚至眼球摘除。近年来真菌性角膜炎的发病率明显上升,其中镰刀菌和曲霉菌是最主要的致病菌。在角膜细胞的固有免疫反应中,Toll样受体(TLR)通过识别不同的病原相关分子模式(PAMP)起重要作用。TLR4能够识别革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分—脂多糖(LPS)。我们前期研究发现TLR2和TLR4能够识别烟曲霉菌(AF)的PAMP,诱导炎性因子表达,趋化多型核中性粒细胞(PMN)向感染灶迁移。目前,TLR的配体预处理引起对病原体刺激的耐受反应的研究是当前抗感染研究的热点方向之一。TLR的配体预处理引起的耐受反应不仅仅是一种低反应性免疫状态,还是一个功能转换过程,这种耐受表型是“细胞再编程”的结果。 [目的]探讨小剂量LPS预处理能否引起角膜对真菌刺激的细胞再编程,从而调控角膜细胞抗感染的固有免疫反应。 [方法]LPS分别刺激人永生化角膜上皮细胞(THCE)和人永生化角膜基质细胞(THSF), ELISA法检测培养上清中细胞因子TNF-α、IL-8和IL-6的分泌。小剂量LPS刺激THSF一定时间后再给予大剂量LPS或AF刺激,1h后收集细胞,实时RT-PCR检测LPS预处理THSF对LPS或AF引起细胞因子及抗菌肽mRNA表达的影响；4h后收集细胞上清,ELISA检测LPS预处理对LPS或AF引起细胞因子及抗菌肽分泌的影响。小剂量LPS预处理THSF一定时间后,给予大剂量LPS或AF刺激4h,收集细胞上清,24孔Transwell小室检测LPS预处理对PMN迁移的影响。 [结果] 1.角膜细胞细胞因子的分泌：与对照组比较,LPS刺激THCE未明显增加IL-8的分泌；AF刺激THCE增加IL-8的分泌,其分泌量达对照组的12倍。与对照组比较,LPS刺激可引起THSF的IL-8分泌的增加,其分泌量随刺激时间延长而上升；TNF-α的分泌未见明显改变。 2.预处理角膜细胞对再次刺激引起的细胞因子产生的影响：与对照组比较,小剂量LPS预处理THSF可抑制大剂量LPS或AF诱导的炎性细胞因子在基因和蛋白水平的表达。 3.LPS预处理对再次刺激引起的抗菌肽表达的影响：LPS刺激实验中,小剂量LPS预处理THSF一定时间后再用大剂量LPS刺激,抗菌肽CCL20的表达较单纯用大剂量LPS刺激显著增加,而LL-37表达的无明显改变。AF刺激实验中,小剂量LPS预处理THSF一定时间后再用大剂量AF刺激,抗菌肽CCL20和Tβ4mRNA的表达较对照组显著增加。 4.LPS预处理对PMN迁移的影响：小剂量LPS预处理一定时间抑制大剂量LPS或AF诱导的PMN向THSF的迁移。 [结论]本研究发现小剂量脂多糖预处理可抑制大剂量脂多糖或烟曲霉菌刺激引起的角膜细胞炎性反应,增加抗感染的能力,主要表现为炎性细胞因子表达减少、抗菌肽表达增加及PMN的迁移受到抑制。这表明角膜细胞再编程的诱导可能为预防和控制真菌性角膜感染提供新的方法。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R772.2

【参考文献】