【摘要】：目的 本实验通过视觉电生理检测形觉剥夺大鼠的F-VEP,观察短期形觉剥夺(7d)是否可以形成形觉剥夺性弱视大鼠模型。通过免疫组织化学方法检测正常和形觉剥夺大鼠视皮层BDNF和SYN动态表达,研究BDNF和SYN与年龄的相关性,及形觉剥夺对其表达的影响,探讨BDNF和SYN与视觉发育和视觉经验的相关性,以期从分子水平为弱视的发病机制提供理论依据。 方法 1.刚出生SPF级SD大鼠21只,雌雄不限,南华大学动物实验中心提供,随机分7组,每组3只,分组情况:正常(N)组分NP14、NP21、NP45、NP120组,单眼剥夺(MD)组分MD21、MD45、MD120组。MD组大鼠生后14d行右眼眼睑缝合(BS)术,造成单眼形觉剥夺弱视模型。将NP21和MD21大鼠于生后21d行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测,记录N1、P1、N2波潜时和N1P1、P1N2振幅。采用SPSS17.0统计分析软件,应用多变量方差分析(Multivariate analysis of variance, MANOVA),比较多组均数向量。 2.大鼠饲养至所需天数时均处以腹麻,灌流,断头,取脑,固定。切取脑组织常规石蜡包埋,行4μm冠状连续切片,切片进行Nissl染色和免疫组织化学方法染色。显微镜下观察BDNF和SYN在视皮层的表达情况,Olympus显微摄像系统采集图片,图像分析软件进行累计光密度(IOD)值测定。各组计量资料以均数±标准差((x|—)±s)表示,采用SPSS17.0统计分析软件对BDNF和SYN的IOD值进行处理:发育不同时限多组间的比较采用单因素方差分析,相同时间段的组间差异采用独立样本的t检验,同组两种蛋白表达的相关性采用Pearson相关性分析。 结果 1.F-VEP检测:与正常和剥夺组大鼠未剥夺眼的F-VEP相比,剥夺组大鼠剥夺眼的F-VEP其N1、P1、N2波潜时延长,N1P1、P1N2波幅降低,差异有显著性(P0.01)。而前两者的F-VEP相比较,差异无显著性(P0.05)。 2.(1)Nissl染色:视皮层神经元胞浆染色,见明显的胞浆突起,核不着色,呈空泡状,视皮质中广泛分布,分布呈现带状。与正常组比较,剥夺组对应视皮层中神经元数目略减少,体积大小不均,核着色稍加深。 (2)大鼠视皮层中BDNF的表达:BDNF阳性反应产物呈棕色颗粒状,分布于神经元胞浆及突起,视皮层各层广泛分布。BDNF表达在NP14时IOD值为5.66±0.99,NP21为12.50±1.38,NP45为12.10±1.56,NP120为4.62±0.90。整体组间差异有显著性(P=0.000),发育时限对BDNF表达有影响,P21=P45P14=P120。MD组大鼠视皮层BDNF表达较同时限NP组分布稀疏,数量减少,差异有统计学意义:MD21时IOD值为4.78±0.70(P=0.000), MD45其IOD值为4.86±0.65(P=0.000) ,MD120其IOD值为4.06±0.43(P=0.025)。BDNF表达受异常视觉经验影响。 (3)大鼠视皮层中SYN的表达:SYN的阳性反应产物呈棕黄色颗粒状,位于前突触,广泛分布于视皮层各层,但神经元胞体、血管、胼胝体均无表达。SYN表达在NP14时IOD值为13.62±1.31,NP21为26.15±1.30,NP45为29.30±1.07,NP120为11.95±0.92。方差分析组间差异有显著性(P=0.000),P45P21P14P120(P=0.000)。SYN在正常视皮层表达,受发育时限影响,与视觉关键期一致。MD21时其IOD值为15.68±1.02, MD45为15.38±0.83,MD120为10.62±0.71。MD组SYN的表达均低于同时限NP组,差异有显著性(P=0.000),SYN表达受视觉经验影响。 (4)BDNF和SYN表达相关关系:分别对NP组、MD组大鼠视皮层中BDNF和SYN的表达量(IOD值)行相关分析。NP组中二者呈显著性正相关关系(r=0.927,P=0.000),MD组中二者呈显著性正相关关系(r=0.574,P=0.000)。 结论 1.在大鼠视觉发育关键期,早期的短期形觉剥夺(7d)可以形成大鼠弱视模型。 2.BDNF和SYN在正常大鼠各个年龄段的视皮层中均有表达,但表达量不一样,呈年龄相关性,与视觉发育关键期的起始和终止时间相符,证实二者在生后的视觉系统发育过程中参与视觉中枢的发育和成熟。进一步研究二者在大鼠弱视对应视皮层中的表达,发现在视觉发育的关键期内其表达均明显低于同时限正常发育组,说明SYN和BDNF的表达受视觉经验的调节,参与弱视的形成。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R777.44
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本文编号：2473585
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