白血病抑制因子在大鼠急性和慢性青光眼模型视网膜中的表达和意义研究

发布时间：2019-10-16 20:35

【摘要】：目的研究白血病抑制因子(Leukemia inhibition factor, LIF)及其相关信号通路分子在急性和慢性高眼压大鼠视网膜中表达的动态变化,并初步探讨其意义。 方法1.健康SD大鼠以前房灌注正常生理盐水的方法使眼压升高至70mmHg,维持1h。右眼作为正常对照。回复正常眼压后12h、24h、2d、3d和7d处死动物。 2.健康SD大鼠烧灼巩膜上静脉建立慢性高眼压模型,眼压升高后3d、1w、2w、3w、4w处死动物。分别取上述模型动物的视网膜组织行TUNEL染色检测视网膜神经节细胞凋亡,以HE染色检测视网膜组织结构变化,透射电子显微镜下观察视网膜组织。取视网膜组织提取总蛋白及总RNA,以Western blot法检测视网膜中LIF. LIF-receptor (LIFR)及LIF下游信号通路分子signal transducers and transcription activators3(STAT3)、磷酸化STAT3(P-STAT3)、serine-threonine kinase (Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、extracellular regulated protein kinases (ERK)和磷酸化ERK (P-ERK)蛋白表达水平,以Real-time PCR检测LIF和LIFR mRNA表达水平。 结果1.与正常对照相比,HE染色结果显示随着时间延长,急性高眼压组视网膜内丛状层及内核层变薄,视神经节细胞数量逐渐减少；TUNEL染色结果显示急性高眼压组细胞凋亡数量显著增加,急性高眼压后24h细胞凋亡数量最多。透射电镜结果显示再灌注后12h及3d,视网膜神经节细胞发生凋亡晚期表现,染色质浓缩、边集,线粒体空泡化,发生明显肿胀,再灌注后12h凋亡细胞数量明显多于再灌注后3d。与正常对照相比,急性高眼压组LIF蛋白表达上调,急性高眼压后12h表达水平最高；LIFR蛋白表达水平于各时间点均高于正常对照组,且随时间延长逐渐升高。LIF mRNA表达水平上调,急性高眼压后12h表达最高；LIFR mRNA在急性高眼压后表达上调,3d时表达水平最高。下游信号通路分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表达均高于对照组。急性高眼压组ERK表达无明显变化,P-ERK表达下调。 2.与正常对照相比,HE染色结果显示慢性高眼压后视网膜内丛状层、外核层明显变薄,神经节细胞减少,细胞核大小不一,慢性高眼压后4w视网膜神经纤维层变薄。TUNEL染色结果显示慢性高眼压组细胞凋亡数量明显增多。慢性高眼压后LIF蛋白表达上调,慢性高眼压后2w表达最高；LIFR蛋白表达水平高于正常对照组,慢性高眼压后4w表达最高。LIF mRNA表达明显上调,慢性高眼压后3d表达最高,LIFR mRNA表达显著高于正常对照组,并于4w时达最高水平。下游信号分子蛋白STAT3、Akt及其磷酸化形式P-STAT3、P-Akt表达均高于对照组；与正常对照相比,慢性高眼压组ERK表达水平无明显变化,P-ERK表达水平2w时无明显变化,3d、1w、3w和4w时表达下调。 结论LIF在急性及慢性高眼压大鼠视网膜中表达的动态变化,提示其可能参与了大鼠视网膜和视神经的损伤/保护过程,STAT3、P-STAT3、Akt、P-Akt与LIF蛋白表达的一致性变化提示LIF可能是通过JAK/STAT3及Akt信号通路介导视网膜和视神经的损伤/保护过程。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R775

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本文编号：2550159