跨角膜电刺激对大鼠视网膜神经元缺血性损伤保护作用的研究

发布时间：2019-10-22 17:34

【摘要】：视网膜缺血在青光眼、糖尿病视网膜病变等众多眼部疾病的发病机制中都发挥重要作用,目前临床上的治疗手段尚不理想。在缺血早期,过高浓度的谷氨酸是触发一系列损伤性级联反应的关键因素之一。而谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)是清除突触间隙中过量谷氨酸的关键蛋白之一,对于防止兴奋性氨基酸毒性的产生具有重要作用。 跨角膜电刺激(Transcorneal electrical stimulation, TES)在一些动物模型和临床研究中都初步显示了良好的神经保护效果,且副作用小,作为一种有潜力的神经保护方法逐步引起了眼科学者的关注。但其发挥具体疗效及作用的机制尚需进一步研究。 本研究目的是在由前房灌注构建的大鼠视网膜缺血-再灌注模型上探讨TES对视网膜神经元缺血性损伤的保护效果,及对GS表达产生的影响。通过存活RGCs数目计数,视网膜组织学分析和ERG等方法从形态及功能上评价TES对神经元的保护效果；用免疫组织化学和Western blot的方法观察视网膜缺血后在TES干预下GS的表达水平,初步探究TES发挥神经保护作用的分子机制。 第一部分 跨角膜电刺激对大鼠视网膜神经元缺血性损伤保护作用的评估 目的评价TES对视网膜神经元缺血性损伤形态和功能的保护作用 方法选取成年雌性SD大鼠为研究对象,分为3组,正常组,假刺激组(电流为0μA,1小时/次),TES组(300μA,1小时/次)。视网膜缺血模型通过前房灌注(120mmHg,1小时)构建,造模后立刻给予两天一次的TES,直至14天。造模后7天、14天后通过视网膜铺片计数荧光金逆标的存活神经节细胞,用石蜡切片分析视网膜各层厚度,用暗适应视网膜电图(ERG)评价视网膜功能。 结果视网膜铺片显示,正常大鼠视网膜的RGCs平均密度是2365±60(个/mm2)。缺血后第7天,假刺激组是1477±60 cells/mm2, TES组是1785±59 cells/mm2;第14天假刺激组是1147±56 cells/mm2,TES组是1414±52 cells/mm2。各时点TES组RGCs的密度与假刺激组有统计学差异(P0.01)。石蜡切片视网膜厚度分析显示,正常大鼠内界膜到外界膜(ILM-OLM),内丛状层(IPL),外核层(ONL)的平均厚度分别为174.3±3.9μm,43.6±0.6μm,58.1±1.0μm。缺血后第7天,ILM-OLM相对正常的平均厚度,假刺激组是86.0%,TES组是96.0%；IPL相对正常的平均厚度,假刺激组是80.9%,TES组是93.1%；ONL相对正常的平均厚度,假刺激组是84.4%,TES组是97.3%。缺血后第14天,ILM-OLM相对正常的平均厚度,假刺激组是84%,TES组是92.9%；IPL相对正常的平均厚度,假刺激组是77.9%,TES组是89.1%；ONL相对正常的平均厚度,假刺激组是82.4%,TES组是93.6%。统计学分析显示,缺血后第7天、14天,TES组ILM-OLM (P＜0.05), IPL (P＜0.01), ONL (P0.01)的平均厚度均显著高于假刺激组。ERG b波振幅统计学分析显示,缺血后7天TES组的b波振幅显著高于假刺激组,并在第14天出现了明显恢复(P0.05)。 结论TES对视网膜神经元缺血性损伤后的形态和功能都有良好的保护作用。 第二部分 跨角膜电刺激对大鼠视网膜缺血后谷氨酰胺合成酶表达的影响 目的研究TES对大鼠视网膜缺血模型谷氨酰胺合成酶表达水平的影响,初步探讨TES发挥神经保护作用的机制。 方法选取成年雌性SD大鼠为研究对象,分为3组,正常组,假刺激组(电流为0gA,1小时／次),TES组(300μA,1小时／次)。视网膜缺血模型通过前房灌注(120mmHg,1小时)构建,造模后立刻给予两天一次的TES,直至14天。造模后6小时、24小时、3天、7天、14天通过免疫组织化学在相同激光共聚焦显微镜条件下比较TES组与假刺激组GS的荧光强度和空间分布的差别,进一步用Western blot比较两组GS的表达水平的不同。 结果免疫组织化学和Western blot分析均显示GS在TES的作用下表达水平明显增加,并且至少持续7天。 结论TES能增加缺血后视网膜Muller细胞上GS的表达水平,这可能降低谷氨酸浓度,从而减轻谷氨酸介导的兴奋性氨基酸毒性,实现对视网膜神经元的保护作用。
【图文】：

图1(A)荧光金逆标的视网膜铺片相对应区域的代表性图片。缺血后7d，14d均可见TES组比假刺激组RGCs数I」多。标尺，50扒11:.(B)和假刺激相比，，TES能泛著增加IRGCs数l习。Mean士SEM(n一7).t一test.**P<0.01.
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R774.1

【参考文献】

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本文编号：2551735