重组人促红细胞生成素对高糖作用下体外培养视网膜神经细胞凋亡及caspase-3蛋白表达的影响

发布时间：2019-11-09 01:58

【摘要】：目的：研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)对高糖作用下体外培养大鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用及其可能的机制。 方法：将出生1-3天大鼠视网膜通过0.125%胰蛋白酶消化制成单细胞悬液,建立一种稳定、可靠的体外培养视网膜神经细胞的方法,并采用免疫细胞化学技术对视网膜神经细胞进行鉴定。用台盼蓝染色观察不同浓度葡萄糖对视网膜神经细胞形态、生长状态及存活数的影响。将体外混合培养3天的原代大鼠视网膜神经细胞随机分为对照组、高糖培养组和不同浓度rhEPO干预组,rhEPO干预组分别在高糖培养液中加入终浓度为5、10、20、40U/ml rhEPO。培养48h后,MTT法检测评价rhEPO干预对高糖损伤视网膜神经细胞的活力影响,并通过免疫细胞化学方法半定量检测不同浓度rhEPO干预高糖损伤神经细胞caspase-3蛋白的表达水平。 结果：体外培养的视网膜神经细胞免疫细胞化学染色显示,所培养细胞大部分抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体反应阳性,神经细胞纯度达到90%以上。视网膜神经细胞在高浓度葡萄糖条件下活性下降并出现大量凋亡细胞,并最终选取30mmol／L葡萄糖干预48小时制备神经细胞高糖模型。应用外源性rhEPO干预对神经细胞的高糖损伤具有保护作用,加入5～40U/ml rhEPO干预后均可有效抑制caspase-3蛋白的表达(P0.01),并且具有一定浓度依赖性。 结论：rhEPO干预可以抑制神经细胞高糖损伤导致的细胞凋亡,而且其神经保护作用具有一定浓度依赖性,抑制细胞凋亡因子caspase-3的表达可能是其保护作用机制之一
【图文】：

其中以30mm0比、50mmol几葡萄糖处理组下降最明显，根据细胞形态变化及生长状态情况，同时为进一步实验，我们最终选取30mm0比葡萄糖干预48小时来制备神经细胞高糖模型(表2.1，图2.10，图2.n)。表2.1不同浓度葡萄糖下神经细胞的存活率(x士s)分组n=8时间 36h48h1三常对照组5~oI/L葡萄糖组20mmol/L葡萄糖组30mmol/L葡萄糖组50~oI/L葡萄糖组99.73士 1.19992份 2.2596.96士2.5778.36士1.9598.02士 1.2197.23士 3.2996.42士1.3776.34士 1.4696.07士 2.2792.08士 3.3885.98士1.4793.18士1.36* 91.27土2.42*78.98士1.29*48‘70士 1.71*25.74士1.46*62.12土2.4192.78士 1.3378.14士 2.3672.39士1.6825.39士1.7590.54士 1.4971.07士 1.3553.06:I=1.2516.74士1.26*:表示与36h组相比P<0.05. 1009O一一‘一__决议 议 ~~~、，~_、、、、 、祖祖\华 华、、\、 、 .....lll口口

caspase一3蛋白表达呈显著性升高(P<o.ol)。经thEPO干预后，各干预组carpase一3蛋白表达显著性下降，且呈一定剂量依赖关系，与高糖培养组比较有显著性下降伊<0.01)(表2.3，图2.14)。结果表明，rhEPO抑制caspase一3蛋白的表达，并呈浓度依赖性，，其中以40u/mlthEPO的作用为最优。表2.3各实验组视网膜神经细胞casPase一3蛋白的表达(n=8，x灯)组别正常对照组高糖培养组高糖巧 U/mlrhEPO组高糖 +10U/mlrhEPO组高糖+20U/mlrhEPO组高糖 +40U/mlthEPO组Caspase一3蛋白 0.554士0.054 1.534士0.049* 1.424士0.078** 1.026士0.053** 0.692土0.046** 0.62肚0.037***:表示与正常对照组相比尸<0.05;**:表示与高糖培养组相比尸<0.01。口正常对照组.高糖培养组口高糖 +SU/mlrhEPO组.高糖 +IOU/mlrhEPO组口高糖 +ZOU/mlrhEPO组D高糖 +4OU/mlrhEPO组CasPase一3图2.14各实验组视网膜神经细胞casPase一3蛋白的表达
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R774.1

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本文编号：2558171