细胞重编程技术和移植治疗视神经损伤的实验研究

发布时间：2019-11-16 19:51

【摘要】：第一部分重编程人成纤维细胞成为视网膜视神经节细胞的研究目的：①在重编程获取来源于病人成纤维细胞诱导型视网膜视神经节细胞(hiRGC细胞)；②研究这些细胞的生物学特征。方法：①筛选与RGC发育、分化相关的诱导因子；②构建携带有转录因子的表达载体；③收集、培养病人头皮成纤维细胞；④载体转染和产生人诱导型视网膜视神经节细胞细胞；⑤hiRGC细胞的生物学特性鉴定；⑥hiRGC细胞的神经电生理特征。结果：以标准流程培养出病人的头皮成纤维细胞,通过转染含有Mashl,Math5和RAX基因的慢病毒表达载体,获得了hiRGC细胞,该细胞具有神经元形态和生理特征；经细胞免疫组织化学鉴定和电生理检测,证明该hiRGC具有与正常神经元相似的生物学和生理学特征。结论：使用Mashl, Math5和RAX三个基因可将成人成纤维细胞直接转变成为具有神经元细胞特征的人诱导型视网膜视神经节细胞。第二部分视网膜视神经节细胞移植玻璃体治疗视神经损伤的效果研究目的：检测诱导型视网膜视神经节细胞在移植进动物视网膜内后的生物学行为、特征和功能,为证明该类细胞在体内具有生理功能提供证据。方法：①流式细胞术筛选hiRGC细胞；②制作裸小鼠视神经损伤模型;③将hiRGC移植进入免疫缺陷鼠视网膜内。③检测hiRGC细胞在宿主眼内的生理、生化特性；④评价hiRGC细胞移植对于裸小鼠视神经功能恢复的影响情况。结果：经流式细胞术分选,得到了约5.41%的hiRGC细胞,这些细胞表达RGC标志；将hiRGC细胞移植到8周龄雄性裸鼠的眼内,发现hiRGC能够迁徙至视网膜并存活,且移植鼠的视神经功能得到改善。结论：人诱导型视网膜视神经节细胞(hiRGC细胞)移植于免疫缺陷鼠眼内后可存活、定植并发挥生理功能,有助于损伤后视神经功能的恢复。
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R779.6

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本文编号：2561970