低能量半导体激光调控胸腺素β4影响人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的研究

发布时间：2020-03-29 20:45

【摘要】：摘要目的研究低能量激光疗法(Low-level laser therapy,LLLT)对人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)增殖迁移的影响;确定LLLT影响HTFs细胞增殖迁移的最适激光辐照参数;探讨低能量激光疗法调控人Tenon囊成纤维细胞中胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)的表达并影响成纤维细胞增殖迁移的机制。方法1.建立LLLT诱导的HTFs细胞株模型于白内障超声乳化手术中取人Tenon囊组织块培育成纤维细胞,体外培养原代HTFs细胞,传代后择取生长良好的对数生长期HTFs细胞试验。设置不同激光剂量组(0,0.5,1.0,2.0,5.0J/cm~2),未照射组作为对照组,采用CCK8法初步选出LLLT促进HTFs细胞生长活力的最适辐照剂量;设定相同激光剂量组,选用直径分别为10mm和35mm的圆形均质光斑进行激光照射,选出LLLT对HTFs细胞的最适辐照参数。2.检测LLLT对HTFs细胞增殖、迁移作用的影响用不同剂量半导体激光分组照射成纤维细胞后,采用CCK-8法检测LLLT对成纤维细胞增殖的影响;采取Transwell法、划痕试验检测LLLT对人Tenon囊成纤维细胞迁移的影响;确定低能量半导体激光影响HTFs细胞增殖、迁移作用的最佳辐照度。3.检测Tβ_4在LLLT诱导的HTFs细胞中的表达水平采用Western Blot和免疫荧光法来检测Tβ4蛋白表达情况,以实时定量PCR检测Tβ4mRNA的表达情况。结果1.成功培育HTFs细胞,细胞呈梭形,漩涡状排列,与HTFs细胞形态相符。2.不同剂量的LLLT对HTFs细胞生长存在剂量依赖性,即在一定的激光辐照剂量范围内HTFs生长加速,且在2.0J/cm~2的LLLT辐照下HTFs细胞生长最快,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);3.相同剂量的LLLT刺激下,不同光斑的大小对HTFs细胞生长活力有所不同;直径为10mm圆形匀致光斑比35mm光斑辐照效果更佳。4.成功建立LLLT诱导的HTFs细胞株模型:低能量半导体激光照射系统功率密度设定为20mw/cm~2,光斑直径为10mm,圆形匀致光斑。采用脉冲波照射模式,设定不同激光剂量分组:0J/cm~2(对照组);实验组0.5J/cm~2(20mw/cm~2 25s);1.0J/cm2(20mw/cm~2 50s);2.0J/cm~2(20mw/cm~2 100s);5.0J/cm~2(20mw/cm~2 250s)。5.在CCK-8法和Transwell法、划痕实验中,表明用低强度半导体激光治疗能促进HTFs的增殖和迁移;且LLLT促进HTFs的增殖和迁移的最适照射剂量为2.0J/cm~2,相比于对照组,差异有统计学意义(P0.001)。6.Western Blot和免疫荧光实验证实了LLLT对于Tβ4的表达具有调控作用,且该作用在照射剂量和时间上存在双向依赖性,促进其活性的最佳照射剂量为2.0J/cm~2,相比于对照组(0J/cm~2)差异有显著意义(P0.05)。此外实时定量PCR扩增得到单一产物,并且在2.0J/cm~2低能量半导体激光照射剂量下,Tβ4在转录水平的表达量明显增强,差异有显著意义(P0.05)。结论1.低能量半导体激光可促进人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移作用;2.胸腺素β4的激活可能与低能量半导体激光诱导成纤维细胞增殖和迁移作用存在一定的相关性;3.低能量半导体激光可能调控胸腺素β4参与人Tenon囊成纤维细胞的增殖与迁移。
【图文】：

12A B图 1-1A 正常对照组 HTFs 细胞，呈典型的梭形，胞体狭长, 较 LLLT 辐照组，，细胞为缓慢，3 天内未能融合。图 1-1B LLLT 辐照后 HTFs 细胞，细胞活性增强，生长致密，融合时细胞呈放射状状走行，单层生长，较对照组，细胞生长迅速，3 天后细胞生长致密达 80%以上融合

12A B图 1-1A 正常对照组 HTFs 细胞，呈典型的梭形，胞体狭长, 较 LLLT 辐照组，细胞为缓慢，3 天内未能融合。图 1-1B LLLT 辐照后 HTFs 细胞，细胞活性增强，生长致密，融合时细胞呈放射状状走行，单层生长，较对照组，细胞生长迅速，3 天后细胞生长致密达 80%以上融合
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R779.6

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本文编号：2606496