miR-142上调AKT2的表达促进角膜新生血管形成

发布时间：2020-04-05 14:34

【摘要】：目的:研究micro RNA142(miR-142)在体外细胞中如何影响其表达,分析验证AKT2与miR-142之间的关系,实验研究其与角膜血管新生的关系,初步找到相关基础机制。方法:本研究设置空白对照组、阴性对照组、过表达miR-142组以及干扰miR-142组。分别利用miR-142模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)过表达和干扰miR-142;CCK-8增殖实验检测miR-142对HUVECs增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因验证AKT2是否为miR-142的直接靶基因;qPCR和Western blot实验检测miR-142对AKT2表达水平的影响。结果:CCK-8增殖实验结果显示空白对照组、阴性对照组和过表达miR-142组在96h的吸光度均值分别为872.21±44.20、842.16±49.54和1407.91±16.58,差异具有统计学意义(F=102.8,P=0.000);干扰miR-142后HUVECs增殖能力明显减弱(空白对照组=919.69±25.46,阴性对照组=856.76±36.22,干扰miR-142组=602.77±25.62;F=72.8,P=0.000);双荧光素酶报告基因结果发现过表达miR-142后AKT2表达水平没有明显变化(对照组=0.36,过表达miR-142组=0.46,P=0.147);qPCR结果显示过表达miR-142(0.408±0.046)后AKT2表达水平较阴性对照组(0.173±0.022)升高(P=0.018),干扰miR-142组(0.16±0.02)较阴性对照组(0.362±0.068)明显降低(P=0.037),差异均具有统计学意义;Western blot实验进一步验证了miR-142对AKT2基因的调控作用;进一步研究发现,shRNA干扰AKT2后miR-142促进HUVECs增殖的作用消失,对照组、过表达miR-142组、过表达miR-142+sh RNA-AKT2组和shRNA-AKT2组的96 h吸光度值分别为981.80±75.40、1357.81±47.56、806.39±49.70和921.59±40.38,差异具有统计学意义(F=40.97,P=0.000)。结论:miR-142通过上调AKT2的表达促进HUVECs增殖,从而促进角膜血管新生。
【图文】：

miR-142促进HUVECs增殖
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R772.2

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本文编号：2615139