ELAM-1在裸鼠鼻咽癌移植瘤转移中的意义

发布时间：2020-04-13 06:04

【摘要】：目的探讨ELAM-1(Endothelial leukocyte adhesion molecule-1)在裸鼠鼻咽癌移植瘤、转移灶,包括淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达,并进一步确定ELAM-1是鼻咽癌转移的重要分子标志物。方法1、细胞培养,将鼻咽癌细胞株SUNE1-亚株5-8F细胞用1640培养基、胎牛血清及青链霉素混合液配置成的完全培养液置于37°C、5%CO_2恒温培养箱中培养,每天观察细胞生长状态,适时更换培养液及进行细胞传代,适时冻存多余细胞;用六孔板分别将细胞培养0h、24h、48h、72h、96h、120h、144h,计数每个时间点的细胞个数,绘制细胞生长曲线。2、Balb/c雌性裸鼠共16只,移植癌细胞前分别称取每只裸鼠的体重,在裸鼠左侧后爪爪垫注射处于对数生长期的鼻咽癌细胞悬浮液20μL(瘤细胞约为2×10~6个),之后每日观察裸鼠生长情况,于接种后8周常规麻醉,处死全部裸鼠,详细解剖检查,测量肿瘤的大小,观察肿瘤以及转移情况,所有标本经福尔马林固定,常规石蜡包埋,切片,做HE染色及免疫组化染色。3、用HE染色观察各病理组织并判断各组织中是否出现转移灶,实验分组:根据是否出现转移癌,将裸鼠分为转移组和非转移组。4、用方差分析比较转移组和非转移组裸鼠初始体重的差异。5、用免疫组织化学法检测ELAM-1在裸鼠鼻咽癌移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达。用image J软件定量分析ELAM-1在各组间表达情况。结果1、所培养的细胞均生长状态良好;16只裸鼠均种瘤成功,且裸鼠在荷瘤期间生命体征均正常,生长状态良好。2、解剖裸鼠,所有组织经福尔马林固定包埋及切片后,共得到27个蜡快,81片切片,HE染色后发现,共10只裸鼠发生转移,为转移组,成功建立了人鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型;其中7只仅淋巴结转移,1只仅腹盆腔转移,2只既发生淋巴结转移又出现腹盆腔转移灶。另6只未见转移灶,为非转移组。3、ELAM-1在所有裸鼠鼻咽癌移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性;其中,非转移组瘤组织均为弱阳性,转移组瘤组织中4例为强阳性、6例为阳性。HE染色显示鼻咽癌细胞的胞核为深蓝色,具有显著的异形性,胞浆及周围的纤维组织呈现深浅不一的红色。正常的淋巴结组织呈圆形或椭圆形,其周围为一层粉红色被膜,被膜下方的深蓝色部分为皮质,中央浅色部分为髓质;转移淋巴结的HE染色显示,在正常的淋巴组织中可见散在大小不等癌巢,部分转移灶中出现坏死。4、转移组与非转移组裸鼠初始体重差异无统计学意义(P0.05)5、转移组ELAM-1的表达高于非转移组,且两组间表达的差异有统计学意义(P0.05);结论ELAM-1在鼻咽原发癌、转移癌中高表达,且与鼻咽癌的转移密切相关,是鼻咽癌转移的重要分子标志物。ELAM-1对鼻咽癌及转移灶的监测及临床治疗以及患者预后的评价等可提供参考,有望为以后研发出检测鼻咽癌早期转移的靶向造影剂、靶向药物等提供动物模型实验思路。
【图文】：

爪垫,裸鼠,台面

转移中的意义作台台面并用医用灭菌棉球擦拭台面后胞放入 37℃、5%CO2培养箱内培养，将验中心 SPF 级实验室，秤量每只裸鼠的垫用 75%酒精消毒后，将上述注射器内7 天后裸鼠爪垫开始肿大，每天观察裸1-2），主要观察裸鼠行动、外观、神经后解剖。

裸鼠,柳叶刀,福尔马林

图 1-2.已成瘤的裸鼠Tumor-bearing nude mice材次性医疗无菌单平铺于解剖板上，常规麻醉后颈椎脱臼，取解剖针固定裸鼠四肢。用镊子提起裸鼠左侧爪垫细用解剖柳叶刀将瘤体剥离，观察组织结构并记录瘤解剖柳叶刀将瘤体切开，放入盛有 10%中性福尔马林溶固定，，在管侧壁做好标记。仔细解剖裸鼠腹腔、胸腔淋巴结组织等，观察各脏器的外观、颜色、大小及形淋巴结和（或）转移瘤（灶），取出所有怀疑异常组织入盛有 10%中性福尔马林溶液的 50mL 离心管中，浸泡
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63

【参考文献】