多频谱免疫组化检测PD-1、PD-L1、CEACAM-1和TIM-3在下咽癌中表达及临床意义

发布时间：2020-04-12 22:28

【摘要】：目的:探索程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)、其主要配体程序性死亡配体1(programmed death ligand-1,PD-L1)、癌胚抗原相关粘附分子1(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1,CEACAM-1)以及T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cells immunoglobulindomain and mucin domain protein-3,TIM-3)在晚期下咽癌患者中的表达以及与临床意义,分析其与病理、肿瘤微环境中的免疫细胞之间的相互关系,为PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3相应抑制剂在晚期下咽患者中的应用提供依据。方法:收集2011/3至2014/11在解放军总医院经手术切除、未经放化疗处理的39例下咽癌患者的相关资料(年龄、性别、手术相关资料、病理分型、临床分期以及随访情况等)和石蜡标本,制备石蜡切片。应用免疫组化染色判断PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3在下咽癌石蜡切片上是否表达以及肿瘤微环境中CD4+T、CD8+T、调节性T细胞(Regulatory cells,Tregs)、以及巨噬细胞的表达情况。对免疫组化染色阳性的标记进行多频谱的免疫组化染色,使用PerkinElmer vectra全自动智能切片分析系统进行定性、定量的统计。结果:在晚期下咽癌中,CD4、CD8以及PD-L1的阳性表达率与患者的病理分型有关,肿瘤微环境中的CD4阳性率随着分化程度的降低逐渐增高(p=0.010.05),肿瘤间质免疫细胞上以及整个微环境中CD8在中分化组中表达率最低,高分化组居中,低分化组中最高(p=0.040.05,p=0.030.05)。肿瘤微环境中PD-L1的表达与患者的病理分型有关(p=0.010.05),中分化组中PD-L1的表达量最低,高分化居中,低分化最高。CEACAM-1、TIM-3与患者的临床分期相关,在IVA期患者中的阳性率高于IIII期(p=0.020.05,p=0.030.05)。PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1、TIM-3阳性率与患者的术后生存时间有关,PD-1、PD-L1、Foxp3以及CEACAM-1阳性表达率高的组患者术后生存时间长(p=0.030.05,p=0.020.05,p=0.040.05,p=0.030.05),TIM-3的阳性表达率高组患者术后生存时间短(p=0.0480.05)。在相关性上,癌旁间质中免疫细胞上PD-1、PD-L1的表达量呈正相关,spearman检查结果:r=0.443,p=0.0050.05。在肿瘤微环境中PD-1、PD-L1与CD8的表达呈正相关,spearman检查结果分别:r=0.686,p0.0001;r=0.575,p=0.0001。癌旁间质中免疫细胞上PD-1、PD-L1与Foxp3的表达呈正相关,spearman检查结果:r=0.617,p0.0001;r=0.667,p0.0001。在肿瘤微环境中,PD-L1与CD4、CD68表达呈正相关,spearman检查结果:r=0.533,p=0.0005;r=0.533,p=0.0005。结论:PD-1、PD-L1、CEACAM-1以及TIM-3在晚期下咽鳞癌中表达。其中,PD-L1阳性率的高低与下咽鳞癌患者肿瘤细胞核的分化程度存在联系;CEACAM-1、TIM-3的表达影响患者的临床分期;PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1、TIM-3阳性率的高低对患者术后生存时间有影响,其中PD-1、PD-L1、Foxp3、CEACAM-1的阳性率高者术后生存时间较长,而TIM-3阳性高者术后生存时间较短。癌旁间质中免疫细胞上PD-1、PD-L1的表达,在肿瘤微环境中PD-1、PD-L1与CD8的表达,癌旁间质中免疫细胞上PD-1、PD-L1与Foxp3的表达,以及PD-L1与肿瘤微环境中的CD4、CD68表达均呈正相关关系。
【图文】：

免疫组化染色,下咽癌,胞浆,淋巴细胞

1-1 晚期下咽癌中 PD-1、PD-L1 、TIM-3、CEACAM-1、CD4、CD8、CD68 以及 Treg免疫组化染色结果。显微镜 400x 。：①-④分别为下咽癌肿瘤微环境中免疫细胞 CD4、CD8、CD68、Foxp3 的表达情况（如箭示）：①-②示 CD4、CD8 表达于肿瘤微环境中淋巴细胞的细胞膜及部分胞浆中，③CD68 表肿瘤微环境的巨噬细胞的细胞膜及部分胞浆中，④Foxp3 表达于部分淋巴细胞的细胞核中-⑧为下咽癌中免疫受体 PD-1、PD-L1 、TIM-3 以及 CEACAM-1 的表达情况（如箭头所示PD-1 表达于淋巴细胞的细胞膜及部分胞浆中，⑥PD-L1 表达于淋巴细胞以及下咽癌细胞的细及部分胞浆中，，⑦TIM-3 表达于淋巴细胞与肿瘤细胞上，量少且部分呈完全无表达状态CEACAM-1 表达于下咽癌肿瘤细胞的胞膜与胞浆上外，淋巴细胞、内皮细胞以及上皮细胞达。小结上述实验通过随机选择的 6 组(每组 8 例)下咽鳞癌的石蜡切片，运疫组化的方法，检测到在下咽鳞状细胞癌上有 PD-1、PD-L1 、TIMEACAM-1 的表达，其中 TIM-3 在部分下咽鳞癌中表达，部分患者中

频谱,免疫组化染色,咽癌,抗体

咽癌中 PD-1、PD-L1 、TIM-3、CEACAM-1、CD4、CD8、CD68 以频谱免疫组化染色结果。显微镜 200X。-G 为第一组染色结果，A-E 箭头所示分别为 PD-1、PD-L1、CD4、CD8抗体染色结果，G 为其六种抗体染色结果，其中背景蓝色为 DAPI 所染ACAM-1、TIM-3 的单一染色结果，TIM-3 的染色背景稍强，且着色细胞与免疫组化染色结果一致。统计 PerkinElmer Vectra 全自动智能切片分析系统进行细胞Pad Prism .6 进行统计分析，其中正太分布的数据使用态分布数据使用非参数检验，具体检验方法见相关部例患者的肿瘤微环境中，PD-1、PD-L1 、TIM-3、C性率平均值分别为：10.45%、25.62%、3.56%以及 9.36率低于 5%者分别为 17(17/39，43.59%)、10(10/39，
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63;R730.43

【参考文献】