耳聋新基因IFNLR1在小鼠内耳表达定位及斑马鱼基因敲低模型的构建与表型和功能分析

发布时间：2020-04-25 23:00

【摘要】：目的感音神经性耳聋是导致言语交流障碍的常见致残性疾病,是全球面临的重大公共卫生问题。耳聋具有高度的遗传异质性,相关基因众多。解放军总医院聋病分子诊断中心课题组在一个中国显性遗传性耳聋大家系中检测到了IFNLR1基因杂合错义突变c.296GA(p.Arg99His),在国际上首次报道了该基因突变可以导致耳聋。本研究为了明确IFNLR1基因与听觉功能的关系并进一步研究该基因的功能,从动物模型入手进行了相关探索。方法(1)利用蛋白免疫印迹法及免疫荧光染色技术明确小鼠内耳中Ifnlr1的表达情况并进行定位;(2)利用吗啉代寡核苷酸技术构建ifnlr1基因敲低斑马鱼模型,结合转基因斑马鱼及特殊染料,观察ifnlr1功能缺失后斑马鱼在不同发育时段的一般状态、侧线系统发育情况以及凋亡和巨噬细胞迁移情况;(3)利用转录组测序技术在斑马鱼m RNA水平对ifnlr1进行功能分析。结果(1)Ifnlr1基因在小鼠耳蜗广泛表达,尤其在Corti’s器的毛细胞、支持细胞及螺旋神经节都有表达;(2)ifnlr1基因敲低斑马鱼在发育后期一般表型出现异常,侧线神经丘数量及丘内的毛细胞、支持细胞数量减少,凋亡和巨噬细胞迁移实验无特异表现;(3)转录组分析发现众多差异表达基因,针对这些基因的GO功能分析及KEGG富集通路功能分析具体见文中数据。结论IFNLR1作为耳聋新基因,已明确其在小鼠的耳蜗内有表达,在与感音神经性耳聋相关的内毛细胞和螺旋神经节都有明确表达。ifnlr1基因敲低斑马鱼模型中侧线神经丘及丘内的毛细胞、支持细胞受累,导致受累的原因可能与凋亡和炎症反应无关,相关机制有待进一步探讨。
【图文】：

图 1-1 Ifnlr1 在小鼠耳蜗的蛋白电泳图：Ifnlr1 分子量为 55kDa。）Ifnlr1 在小鼠内耳的表达定位采用免疫荧光法检测了 Ifnlr1 蛋白在小鼠内耳中的分布及表达情况

图 1-2 Ifnlr1 在小鼠内耳免疫荧光定位图（1）注：图 A 为 10 倍镜下耳蜗免疫荧光图，白色“ ”指示 Corti’s 器，黄色“ ”指示螺旋神经节，蓝色“ ”指示前庭膜。图 B 为 40 倍镜下螺旋神经节免疫荧光图。图 C 为 100 倍油镜下 Corti’s器免疫荧光图，白色“ ”指示内毛细胞，黄色“ ”指示外毛细胞，白色“ ”指示内柱细胞，黄色“ ”
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R764.43

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本文编号：2640788