芳香烃受体在实验性自身免疫性葡萄膜炎中对先天性免疫的调节作用

发布时间：2020-05-31 12:34

【摘要】：目的葡萄膜炎是常见致盲眼病之一。芳香烃受体(Aryl hydrocarbon receptor,Ah R)是一种受配体激活的核受体,在人类葡萄膜炎中发挥了一定的免疫调节作用,但目前明确的机制还不清楚。本文拟用Ah R亲和力最强的配体2,3,7,8-四氯二苯-对-二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)来研究Ah R在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的作用及其机制。方法选择C57BL/6J雌性小鼠54只,按随机数字表法随机分为三组:Na?ve组(n=18)、EAU+安慰剂组(n=18)和EAU+TCDD组(n=18)。采用视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白651-670(IRBP651-670)建立小鼠EAU模型。EAU+TCDD组小鼠自免疫前1天腹腔注射TCDD,EAU+安慰剂组同法给予等体积空白溶媒(橄榄油)。建模后第14天用裂隙灯观察小鼠眼球并进行临床评分;眼球石蜡切片行HE染色评估小鼠视网膜病理改变并评分;伊文思蓝染色评估血视网膜屏障完整性;Western blotting检测紧密连接蛋白和凋亡相关蛋白表达、巨噬细胞/小胶质细胞极化标志物和相关通路蛋白的表达,TUNEL检测视网膜细胞凋亡水平,通过免疫荧光和免疫组化检测巨噬细胞/小胶质细胞表达,ELISA检测促炎细胞因子的表达。结果免疫后第14天,与EAU+安慰剂组相比,EAU+TCDD组小鼠临床评分和病理评分明显改善,血眼屏障功能明显改善,紧密连接蛋白表达明显升高,细胞凋亡明显减轻,巨噬细胞/小胶质细胞活化明显减少,M1型极化标志物表达减少,M2型极化标志物增加,促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达明显降低,NF-κB,STAT和Notch通路受到抑制。结论1、TCDD可以激活EAU小鼠视网膜中的Ah R,起到免疫调节作用。2、TCDD激活Ah R后可以减轻EAU小鼠血眼屏障破坏,抑制视网膜细胞的凋亡水平,促进巨噬细胞/小胶质细胞从M1型向M2型极化,减少促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌。3、TCDD激活Ah R后,可能通过抑制NF-κB,STAT和Notch通路来减轻EAU小鼠的炎症反应。
【图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文P<0.05为差异具有统计学意义。2 结果2.1 TCDD 改善 EAU 小鼠的临床评分免疫后第14天，EAU+安慰剂组小鼠显示了明显的EAU征象，而EAU+TCDD组小鼠的眼球仅有轻微的炎症征象（图1a）。Naive组、EAU+安慰剂组和EAU+TCDD组小鼠的平均临床评分分别为0，1.42±0.49和0.56±0.70（图1b）。

图 2 TCDD 对 EAU 病理评分的影响Figure 2 Effects of TCDD on the pathological scores of EAU(Scale bar, 20μm. n=6, **p<0.01 vs the Naive group, ##p<0.01 vs the EAU+vehicle group)2.3 TCDD 减轻 EAU 小鼠血眼屏障的破坏免疫后第 14 天，我们用对各组小鼠视网膜进行伊文思蓝染色和检测紧密连接蛋白的表达来评估血眼屏障的完整性。伊文思蓝染色结果显示，Naive 组的视网膜血管未见渗出，而 EAU+安慰剂组的视网膜血管见大量渗出。在用 TCDD 治疗的EAU 小鼠中，我们只观察到轻微染料渗出（图 3）。另外，，我们用 Western blotting 检测各组小鼠视网膜中紧密连接蛋白 claudin-5、occludin 和 zo-1 的表达水平，发现与 Naive 组相比，EAU+安慰剂组的紧密连接蛋白表达水平明显降低（p<0.001）。而在 EAU+TCDD 组中，claudin-5（p<0.05）、occludin（p<0.05）和 zo-1（p<0.01）的蛋白表达水平较 EAU+安慰剂组小鼠有所
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R773.9

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本文编号：2689868